5-脂氧合酶抗体的应用

背景^[1-3]

5-脂氧合酶抗体是一类可以特异性结合5-脂氧合酶的多克隆抗体，主要用于体外检测5-脂氧合酶的WB、Elisa、IP、IF、IHC等免疫学实验。

5-脂氧合酶是脂氧酶基因家族的成员，在从花生四烯酸合成白三烯的过程中起着双重作用。编码的蛋白在骨髓细胞中特异性表达，催化花生四烯酸转化为5(S)-氢过氧-6-反式-8,11,14-顺式-二十碳四烯酸，并进一步转化为烯丙基环氧化物5(S)-反式-7,9-反式-11,14-顺式-二十碳四烯酸（白三烯A4）。白三烯是一些炎症和过敏性疾病的重要介体。该基因启动子区域的突变导致对用于治疗哮喘的抗白三烯药物的反应减弱，也可能与动脉硬化和一些癌症有关。已经观察到替代剪接的转录物变体，但它们的全长性质还没有被确定。

5-脂氧合酶抗体免疫组化

脂氧合酶（Lipoxygenase,LOX）是一种氧合酶，广泛存在于生物体内，如植物、动物、藻类、真菌、面包酵母、氰细菌等。在植物中脂氧合酶的主要反应底物是亚麻酸和亚油酸，在动物中脂氧合酶的主要反应底物是花生四烯酸。已有研究表明，LOX在植物中可能参与调控植物的生长、发育、成熟、衰老和防御过程。在动物中，LOX主要参与炎症反应重要调节分子如白三烯、前列腺素等的形成。

5-脂氧合酶蛋白是花生四烯酸代谢途径中的一种关键酶，在恶性肿瘤的发生、发展过程中起了重要作用。抑制5-脂氧合酶及其产物的表达有可能预防和逆转恶性肿瘤的发生。

应用^[4][5]

用于5-脂氧合酶在外科脑损伤模型大鼠脑组织中的表达及其可能的作用研究

研究大鼠外科脑损伤（SBI）后5-脂氧合酶（5-LOX）在脑组织中表达的空间分布,细胞定位和随时间变化的规律,并探讨其在外科脑损伤发病中的作用及可能的机理。

方法:1.右侧额叶切除法建立大鼠外科脑损伤模型;

2. Garcia评分和杠杆平衡评分对动物进行神经行为学功能检测;

3. 干湿重法测量脑组织的含水量,检测大鼠在外科脑损伤后不同时间点脑组织含水量的变化情况;

4. 苏木素-伊红染色方法观察外科脑损伤后大鼠脑组织的基本病理变化;

5. 免疫荧光化学染色方法检测外科脑损伤后5-LOX的空间分布及细胞定位;

6. 生物化学法检测外科脑损伤后SOD的活性和MDA的含量;

7. Western blotting检测外科脑损伤后5-LOX蛋白,p-5-LOX（Ser 271）蛋白与NF-κB蛋白的表达水平,探讨它们在外科脑损伤中可能的作用及机理。

结果:1.神经行为学评分:外科脑损伤术后1d和3d,大鼠出现明显的神经功能障碍,7d组的神经功能评分有所改善。Garcia评分中,损伤后1d、3d、7d组的评分与假手术组相比具有统计学差异（P＜0.01）,损伤后1d与3d组相比评分具有统计学意义（P＜0.05）,损伤后7d与1d,3d组相比,评分也具有统计学意义（P＜0.05）。在杠杆平衡评分中,损伤后1d、3d、7d与假手术组相比评分具有统计学差异（P＜0.01）,但1d、3d和7d组之间没统计学差异。

2. 脑组织含水量:外科脑损伤后大鼠损伤侧脑组织（右额叶）含水量呈先增加后恢复的趋势,损伤后3d组脑组织含水量最高;与假手术组和损伤后7d组相比,1d,3d组大鼠损伤侧脑组织（右额叶）含水量增加有统计学意义（P＜0.05）;3d组损伤侧脑组织（右额叶）含水量较1d组也有增加,但没有统计学意义。

3. H＆E染色:假手术组细胞结构完整,细胞间质无水肿。SBI术后脑细胞排列走形紊乱,细胞间间隙增大,细胞水肿。在损伤的边缘有神经变形区,组织内可以发现间断的神经元坏死,伴有水肿的星形胶质细胞,多形核细胞与巨噬细胞的组织浸润。神经元坏死,细胞质呈嗜酸性,细胞核固缩,组织间隙变宽。各时间点均有空泡形成,以损伤后3d为重。损伤后7d,病变仍可以观察到,但是细胞水肿和白细胞浸润有所减少。

4. 免疫荧光染色:5-LOX在假手术组几乎不表达,在1d和3d组表达增加,在7d组表达量有所减少;5-LOX在损伤同侧的损伤区域周围表达明显增加,而在损伤对侧几乎无表达;从细胞分布和定位来看,5-LOX在神经元的胞浆中表达最多,其次是在神经胶质细胞的胞浆中有较多表达,小胶质细胞的胞浆偶有阳性着色,侵入脑组织的白细胞都有表达。

5. 氧化应激相关指标的化学检测:与假手术组相比,SOD活性在SBI术后1d和3d明显降低（P＜0.05）,7d后有轻度回升;相反,MDA含量在SBI术后1d和3d组明显升高（P＜0.05）,7d后有所降低。

6. Western bolt检测:在外科性脑损伤后1d,3d组,损伤周边脑组织中5-LOX、p-5-LOX（Ser271）和NF-κB水平显著升高,与假手术组相比具有统计学意义（P＜0.05）,术后1d达到高峰。术后第7d 5-LOX、p-5-LOX（Ser 271）和NF-κB表达均降低,与1d,3d组相比具有统计学意义（P＜0.05）。

结论:外科脑损伤后,5-LOX在损伤区周围的脑组织中被激活,可导致脑组织炎症级联反应,也可能引起氧化应激损伤;提示在术前通过预处理干预其表达或在术后及时使用其抑制剂有可能成为改善脑损伤症状的有效措施。

参考文献

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