实验室内常用的Tris缓冲液

当往某些溶液中加入一定量的酸和碱，或加少量水稀释时，这类溶液的pH值基本保持不变，我们称这样的溶液叫做缓冲液，它在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义。

三羟甲基氨基甲烷（Tris）是一种应用广泛的有机物，化学式为C4H11NO3，白色结晶颗粒。Tris及其衍生物常用于生物学实验中缓冲液的制备，制作药物等，尤其蛋白质及核酸相关的实验中都需要用Tris作为生物缓冲剂。

优点

1、 Tris为弱碱，只用这一种缓冲体系可配制由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；

2、对实验结果干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

PH范围

室温（25℃）下，缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。

一般加入盐酸/氢氧化钠调节pH值至所需值，同时应注意温度的影响。

Tris缓冲液：pH=7.5~9.0；

Tris-HCl缓冲液：pH＝7.5~8.5；

Tris-磷酸盐缓冲液：pH＝5.0~9.0。

Tris缓冲液

一、TBS缓冲液

TBS缓冲液是Tris-HCl缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液。

一般为10mmol/L Tris含0.9%NaCl，用1N HCl调pH至7.4，多为贮存液，作为洗膜缓冲液时加Tween配制为TBST。

缓冲液的pH值易受溶液浓度和温度影响，且易吸收空气中的CO2，所以配制好的缓冲液要密封保存。此缓冲液会干扰某些pH电极，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

二、TBST缓冲液

TBST是TBS＋Tween的缩写，含有Tris-HCl，NaCl，Tween20，是做Western Blot常用的一种洗膜缓冲液。WB实验中，为了防止曝光图背景太高，在孵育时，混有Tween 的TBST 能洗掉PVDF膜上非特异性吸附的蛋白质。Tween是一种离子表面活性剂，有复性抗原作用，可提高抗体特异性结合。TBST缓冲液于室温储存，若温度过低，会产生沉淀，可溶解或加热后使用。

三、TE缓冲液

TE缓冲液是Tris-HCl缓冲液 +EDTA，一般用作溶解剂或保持剂，主要是调控PH，常被用于核酸电泳。TE缓冲液是弱碱性，对DNA的碱基有保护作用，因此，DNA在TE中的稳定性较好，不易被破坏完整性或产生开环及断裂，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。

四、TAE缓冲液

TAE缓冲液是将TE缓冲液中的盐酸换成乙酸（Tris/Acetate/EDTA）。

TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量，且双链线状DNA在其中的迁移率较快，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。但是，TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳不可用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

五、TBE缓冲液

TBE缓冲液是将TE缓冲液中的盐酸换成硼酸（Tris/Borate/EDTA）。

TBE缓冲液常用于丙烯酰胺实验以及琼脂糖凝胶电泳。TBE Buffer为无色澄清液体，可在室温中储存，25℃时的pH值为8.2~8.4。在使用时要注意的是TBE Buffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶。TBE可用于长时间电泳，但是，超螺旋在TBE缓冲液中电泳时测出的相对分子质量会稍大于实际分子质量。