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实验室内常用的Tris缓冲液

发布日期:2022/9/26 9:54:49

当往某些溶液中加入一定量的酸和碱,或加少量水稀释时,这类溶液的pH值基本保持不变,我们称这样的溶液叫做缓冲液,它在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义。

三羟甲基氨基甲烷(Tris)是一种应用广泛的有机物,化学式为C4H11NO3,白色结晶颗粒。Tris及其衍生物常用于生物学实验中缓冲液的制备,制作药物等,尤其蛋白质及核酸相关的实验中都需要用Tris作为生物缓冲剂。

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优点

1、 Tris为弱碱,只用这一种缓冲体系可配制由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;

2、对实验结果干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

PH范围

室温(25℃)下,缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。

一般加入盐酸/氢氧化钠调节pH值至所需值,同时应注意温度的影响。

Tris缓冲液:pH=7.5~9.0;

Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;

Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0。

Tris缓冲液

一、TBS缓冲液

TBS缓冲液是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液。

一般为10mmol/L Tris含0.9%NaCl,用1N HCl调pH至7.4,多为贮存液,作为洗膜缓冲液时加Tween配制为TBST。

缓冲液的pH值易受溶液浓度和温度影响,且易吸收空气中的CO2,所以配制好的缓冲液要密封保存。此缓冲液会干扰某些pH电极,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

二、TBST缓冲液

TBST是TBS+Tween的缩写,含有Tris-HCl,NaCl,Tween20,是做Western Blot常用的一种洗膜缓冲液。WB实验中,为了防止曝光图背景太高,在孵育时,混有Tween 的TBST 能洗掉PVDF膜上非特异性吸附的蛋白质。Tween是一种离子表面活性剂,有复性抗原作用,可提高抗体特异性结合。TBST缓冲液于室温储存,若温度过低,会产生沉淀,可溶解或加热后使用。

三、TE缓冲液

TE缓冲液是Tris-HCl缓冲液 +EDTA,一般用作溶解剂或保持剂,主要是调控PH,常被用于核酸电泳。TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护作用,因此,DNA在TE中的稳定性较好,不易被破坏完整性或产生开环及断裂,TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。

四、TAE缓冲液

TAE缓冲液是将TE缓冲液中的盐酸换成乙酸(Tris/Acetate/EDTA)。

TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量,且双链线状DNA在其中的迁移率较快,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。但是,TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳不可用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。

五、TBE缓冲液

TBE缓冲液是将TE缓冲液中的盐酸换成硼酸(Tris/Borate/EDTA)。

TBE缓冲液常用于丙烯酰胺实验以及琼脂糖凝胶电泳。TBE Buffer为无色澄清液体,可在室温中储存,25℃时的pH值为8.2~8.4。在使用时要注意的是TBE Buffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶。TBE可用于长时间电泳,但是,超螺旋在TBE缓冲液中电泳时测出的相对分子质量会稍大于实际分子质量。

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