大鼠糖化血红蛋白A1C(GHBA1C)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠糖化血红蛋白A1C(GHBA1C)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中糖化血红蛋白A1C(GHBA1C)的含量。

原理：大鼠糖化血红蛋白A1C(GHBA1C)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA），是通过已知GHbA1c浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将GHbA1c和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中GHbA1c的活性浓度呈比例关系。

大鼠糖化血红蛋白A1C(GHBA1C)ELISA试剂盒

样品收集、处理及保存方法

1)血清：

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2)血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3)尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

操作步骤

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于冠心病患者血清糖化血红蛋白A1c型水平与冠状动脉狭窄程度的相关性研究

探讨冠心病（CHD）患者血清糖化血红蛋白A1c型（GHbA1c）水平与冠状动脉狭窄程度的关系及其作用机理。

方法:选取126例经冠状动脉造影（CAG）检查确诊为冠心病（CHD）的患者分成2组,其中,冠心病组67例,冠心病并糖尿病（DM）组59例。与此同时,选取除外CHD和DM的人群46例作为对照组。全部研究对象测定血清糖化血红蛋白A1c型（GHbA1c）水平及一般生化指标,并以Gensini积分值作为评估冠状动脉狭窄程度的指标。分析CHD患者血清GHbA1c水平与冠状动脉狭窄程度之间的相关性。结果:CHD组的血清GHbA1c水平（6.16±0.43%）及Gensini积分值（74.5±16.5）均高于对照组（5.52±0.41%,32.5±15.5）（P﹤0.01）,CHD合并DM组的血清GHbA1c水平（7.38±0.39%）及Gensini积分值（80.5±13.5）均显著高于CHD组和对照组（P﹤0.01）。采用Spearman秩相关及多因素多元线性回归分析显示,血清GHbA1c水平与Gensini积分值呈正相关（=0.367,P﹤0.01）。

结论:CHD患者血清GHbA1c水平与冠状动脉狭窄程度呈正相关。血清GHbA1c水平是影响CHD冠状动脉功能的重要危险因子。

参考文献

[1]HbA 1c and all-cause mortality risk among patients with type 2 diabetes[J].Weiqin Li,Peter T.Katzmarzyk,Ronald Horswell,Yujie Wang,Jolene Johnson,Gang Hu.International Journal of Cardiology.2016

[2]Advanced Glycation End Products:Association with the Pathogenesis of Diseases and the Current Therapeutic Advances[J].Thekkuttuparambil A.Ajith,Puzhikunathu Vinodkumar.Current Clinical Pharmacology.2016(2)

[3]Insulin Resistance and Diabetes Mellitus in Contemporary Cardiac Rehabilitation[J].Sherrie Khadanga,Patrick D.Savage,Philip A.Ades.Journal of Cardiopulmonary Rehabilitation and Pre.2016

[4]Effect of postprandial hyperglycaemia on coronary flow reserve in patients with impaired glucose tolerance and type 2 diabetes mellitus[J].Ikeda Hiroyuki,Uzui Hiroyasu,Morishita Tetsuji,Fukuoka Yoshitomo,Sato Takehiko,Ishida Kentaro,Kaseno Kenichi,Arakawa Kenichiro,Amaya Naoki,Tama Naoto,Shiomi Yuichiro,Lee Jong-Dae,Tada Hiroshi.Diabetes and Vascular Disease Research.2015(6)

[5]李想.冠心病患者血清糖化血红蛋白A1c型水平与冠状动脉狭窄程度的相关性研究[D].山西医科大学,2017.