人胸腺非依赖性抗原(TI-AG)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人胸腺非依赖性抗原(TI-AG)ELISA试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中胸腺非依赖性抗原(TI-AG)含量。

实验原理：

用胸腺非依赖性抗原(TI-AG)抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的TI-AG会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗TI-AG抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠HAT 1抗体与结合在包被抗体上的TI-AG结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，HAT 1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中HAT 1的浓度。

人胸腺非依赖性抗原(TI-AG)ELISA试剂盒

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

实验步骤：

1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于激素非依赖性前列腺癌细胞免疫水平变化及“扶正抑瘤法”干预的研究

探讨激素非依赖性前列腺癌细胞免疫水平变化,评价扶正抑瘤法治疗激素非依赖性前列腺癌的疗效及对其细胞免疫水平影响。

方法:以36例激素依赖性前列腺癌患者作为研究对象,39例激素依赖期前列腺癌患者作为研究对照组。使用流式细胞仪技术（FCM）测定其外周血T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）及NK细胞(CD（16+56）+)水平变化。同时按治疗方法差异自然入选分组的队列研究方法,将36例激素依赖性前列腺癌患者又分为治疗组及对照组,对照组予以现行“前列腺癌诊断治疗指南”二线内分泌治疗,治疗组在二线内分泌治疗基础上予以患者扶正抑瘤法中医药治疗,均在治疗前后记录患者临床症状变化、测定其血清前列腺特异性抗原（PSA）变化、B超检查局部病灶的变化、行Karnofsky行为量表评分;治疗组及对照组均在治疗3个月后再次取外周血以FCM测定其CD3+、CD4+、CD4+及CD916+56)+水平。

结果治疗前激素非依赖性前列腺癌患者CD3+T、CD<sup>+T及CD8+T水平均明显下降,与前列腺癌激素依赖期患者（对照组）比较差异有统计学意义（P＜0.05）。CD（16+56）+N水平亦下降明显,与对照组比较差异有统计学意义。但CD4+/CD8+比值上升,与对照组比较差异无统计学意义。经治疗后,在临床症状改善方面:治疗组临床有效率为78.94%,对照组有效率为62.5%。而在PSA水平控制方面:治疗组PSA值下降＞50%者14例,有效率为73.68%;PSA持续上升者2例,对照组PSA值下降＞50%者7例,有效率为43.75%;Ridit分析均示差异有统计学意义（P＜0.05）。

在生存质量评分方面:治疗组的Karnofsky评分在治疗后与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0.01）。虽然对照组虽经治疗后Karnofsky评分稍升高,但前后对比差异无统计学意义。在细胞免疫水平方面:治疗组在CD3+及CD4+水平在治疗前后比较差异有统计学意义（P＜0.05）,对照组的CD3+、CD4+水平在治疗前后对比均无统计学意义。虽然治疗组CD8+水平治疗后较治疗前轻微下调,而对照组CD8+水平治疗后较治疗前轻微上调,治疗前后对比差异均无统计学意义。CD4+/CD8+T比值治疗组经治疗后明显提高,前后对比差异有统计学意义（P＜0.05）;而对照组的CD4+/CD8+T比值在治疗前后对比差异无统计学意义。治疗组的CD（16+56）+N水平经治疗后上调,在治疗前后比较差异有统计学意义（P＜0.05）。而对照组的CD（16+56）+N水平在治疗前后对比无统计学意义,经治疗后CD（16+56）+N水平反而下降。

参考文献

[1]A review of vaccine clinical trials for non-small cell lung cancer[J].Nemunaitis,Nemunaitis.Expert Opinion on Biological Therapy.2007(1)

[2]Immunotherapy with autologous tumor cell-BCG vaccine in patients with colon cancer:a prospective study of medical and economic benefits[J].C.A.Uyl-de Groot,J.B.Vermorken,M.G.Hanna,P.Verboom,M.T.Groot,G.J.Bonsel,C.J.L.M.Meijer,H.M.Pinedo.Vaccine.2005(17)

[3]Adjuvant autologous renal tumour cell vaccine and risk of tumour progression in patients with renal-cell carcinoma after radical nephrectomy:phase III,randomised controlled trial[J].The Lancet.2004(9409)

[4]Coregulator Function:A Key to Understanding Tissue Specificity of Selective Receptor Modulators[J].Carolyn L.Smith,Bert W.O’Malley.Endocrine Reviews.2004(1)

[5]古炽明.激素非依赖性前列腺癌细胞免疫水平变化及“扶正抑瘤法”干预的研究[D].广州中医药大学,2009.