人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒是一种用于检测血清或其他体液中CYFRA21-1水平的实验工具。CYFRA21-1是细胞角蛋白19的一个可溶性片段，通常在上皮细胞中表达。它在一些上皮来源的恶性肿瘤中表达增加，特别是非小细胞肺癌（NSCLC）。因此，CYFRA21-1常被用作肿瘤标志物，尤其在NSCLC的诊断、疾病进展监测和治疗效果评估中。

人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒的主要成分包括酶标板、试剂、标准品等，通常以盒装液体的形式提供。实验过程中，需要先将纯化的小鼠新生甲状腺素抗体包被在微孔板上，制成固相抗体。然后，将待测样本加入到微孔中，样本中的CYFRA21-1会与固相抗体结合。接着，加入HRP标记的新生甲状腺素抗体，与已结合的CYFRA21-1形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤去除未结合的成分后，加入底物TMB进行显色反应。TMB在HRP酶的催化下会转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样本中的CYFRA21-1浓度成正比。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），并通过标准曲线计算样本中CYFRA21-1的浓度。

人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒

人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒可以用于肺癌血清标志物流式微球阵列的分析性能研究

通过探讨检测下限、精密度、特异性、方法学比对和线性范围,评价基于流式细胞仪的肺癌标志物流式微球阵列的分析性能。本实验采用流式细胞术,测试肺癌标志物流式微球阵列试剂盒及人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒检测血清中肺癌标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的检测下限、精密度、特异性和线性范围;以免疫印迹法验证抗体识别抗原的专一性;测验血红蛋白、三酰甘油、胆红素对CEA、Cyfra21-1和NSE检测的干扰作用;通过与电化学发光免疫分析法比对,考察了肺癌标志物流式微球阵列的准确性。

人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)Elisa试剂盒结果显示CEA、Cyfra21-1和NSE的检测下限分别为1.71、3.97、2.27 pg/mL,批内精密度均≤10%,批间精密度均≤15%;特异性结果显示,CEA、Cyfra21-1、NSE的配对抗体能分别专一识别抗原,CEA与同源类似物癌胚抗原相关黏附分子6(CEACAM6)、cyfra21-1与CK18(重组人细胞角蛋白18)、NSE与NNE(非神经元特异性烯醇化酶)无明显交叉反应;三酰甘油、胆红素对血清样本检测无显著干扰作用,500 ng/mL的血红蛋白能够明显干扰Cyfra21-1(P<0.05)和NSE(P<0.05)的检测;流式微球阵列和电化学发光免疫分析的CEA、Cyfra21-1、NSE检测结果的相关系数r值分别为0.984 2、0.962 2、0.982;CEA、Cyfra21-1、NSE的线性范围分别为355.76 pg/mL367.74ng/mL、87.89 pg/mL107.80 ng/mL、90.12 pg/mL86.07 ng/mL。总之,肺癌标志物流式微球阵列的分析性能符合要求。

参考文献

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