什么是肺炎克雷伯菌及其检测方法

背景及概述^[1][2]

肺炎克雷伯菌是肠杆菌科克雷伯氏菌属中最为重要的一类菌(俗称肺炎杆菌)，其所致疾病占克雷伯氏菌属感染的95％以上。肺炎克雷伯菌为革兰阴性杆菌，病变中渗出液粘稠而重，致使叶间隙下坠。克雷伯氏菌对外界抵抗力强，对多数抗生素易产生耐药性。在健康人的呼吸道和肠道正常菌丛中、自然界水和谷物中均能分离到克雷伯氏菌。

耐药性^[1]

肺炎克雷伯菌是临床分离及医院感染的重要致病菌之一，随着β-内酰胺类及氨基 糖苷类等广谱抗菌素的广泛使用，细菌易产生超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)和头孢菌素酶 (AmpC酶)以及氨基糖苷类修饰酶(AMEs)，对常用药物包括第三代头孢菌素和氨基糖苷类呈现出严重的多重耐药性。肺炎克雷伯菌引起的医院感染率近期逐年增高，且多耐药性菌株的不断增加常导致临床抗菌药物治疗的失败和病程迁延。肺炎克雷伯菌耐药机制主要包括产生β-内酰胺酶、生物被膜的形成、外膜孔蛋白的缺失。抗菌药物主动外排等，抗菌药物耐药基因水平播散是多药耐药菌株临床加剧的重要原因。

肺炎克雷伯菌分为3个亚种：肺炎亚种、臭鼻亚种和鼻硬结亚种。本菌属为周围环境及人呼吸道的常居菌群，也是常见的条件致病菌。目前，本菌属引起的革兰阴性菌感染日益增多，其中以肺炎克雷伯肺炎最多见。肺炎亚种的菌体呈椭圆形或球杆状，多成双排列，菌体外绕以明显的荚膜，较菌体宽2～3倍。无芽孢，无鞭毛，无动力，有菌毛。培养物上菌体长，呈多形性，有时可见丝状物。需氧或兼性厌氧，在普通培养基上能生长。有O抗原和K抗原，前者为脂多糖类，后者为多糖类。共有82个血清型。对理化因素的抵抗力不强，对一般消毒剂敏感，56～60℃加热迅速死亡。

呼吸道来源的菌株对青霉素、链霉素、氯霉素和四环素敏感，但易获耐药性。臭鼻亚种最早由臭鼻症患者的鼻腔分离出来，多见于北欧。多数菌株可在以铵为惟一氮源，以葡萄糖为惟一碳源的培养基上生长。鼻硬结亚种与肺炎亚种基本相似。本菌分解糖类产酸不产气，抵抗力基本与肺炎亚种同。克雷伯菌属多感染重病老人及幼儿，死亡率较高，也是国内医院感染中最多见的病菌之一。肺炎亚种能引起婴儿严重的肠炎、肺炎、脑膜炎等和成人的医源性尿道感染。臭鼻亚种可致臭鼻症。鼻硬结亚种可使人鼻咽、喉和其他呼吸道结构发生慢性肉芽肿，使组织坏死。

菌落特征^[2]

肺炎克雷伯菌在血平板上生长，形成灰白色，大而黏，光亮且易成黏丝的菌落，如下图：

在MacConkey培养基上生长，发酵乳糖产酸形成较大粉红色黏稠的菌落，如下图：

检测方法^[2]

目前检测肺炎克雷伯菌感染的方法主要包括：微生物培养法和生理生化检测、组织病理学观察、显微镜镜检以及PCR、实时荧光PCR等分子诊断方法。

微生物培养法耗时且培养条件复杂，生理生化检测结果的判读依赖于操作者的主观判断，从而导致结果重复性差，易错判；组织病理学观察依赖切片技术，耗时；显微镜技术依赖涂片技术；分子检测如PCR、 实时荧光PCR技术需要昂贵的仪器设备、技术要求高。肺炎克雷伯菌可以通过抗原与抗体的特异性结合，根据循环外周血中肺炎克雷伯菌的抗体的数量，可判断是否感染肺炎克雷伯 菌，用于肺炎克雷伯菌感染的临床辅助诊断，可以快速、敏感的检测出人体的感染情况。亟需一种更方便有效的专门针对肺炎克雷伯菌的检测手段。

CN201810091934.9提供一种肺炎克雷伯菌的检测试剂盒及其检测方法，以期解决上述现有技术中存在的至少部分技术问题。为了实现上述目的，本发明提供一种肺炎克雷伯菌的检测试剂盒，其包括氨基酸序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的6条多肽，分别为：

SEQ ID NO.1：Glu Glu Gly Ala Glu Ala Ala Ala Gly Ile Val Leu Leu Ala Ala Gln Gly Ser Thr Ala；

SEQ ID NO.2：Gln Glu Leu Gly Gly Ile Arg Glu Ser Glu Ala Val Thr Ala Ser Ala Arg Thr Gly Gly；

SEQ ID NO.3：Thr Met Gly Ala Arg Arg Glu Gly Ile Glu Thr Ala Ala Pro Ala Thr Ala Thr Gly Ala；

SEQ ID NO.4：Glu Ala Met Asp Leu Ala Glu Ala Thr Ile Ala Ser Thr Leu Ser Glu Gly Gly Ala Ala；

SEQ ID NO.5：Gly Leu Thr Ile Val Gly Ala Gly Glu Gly Ser Leu Lys Ala Ala Thr Ala Ile Gly Glu；

SEQ ID NO.6：Glu Gly Asp Thr Ala Ile Ser Ala Thr Gly Leu Glu Ala Ala Met Ser Ala Ile Gly Ala。

本发明中，氨基酸序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的6条多肽在试剂盒中作为TB刺激物，用于检测反应。本发明的有益效果为：本发明提供的包括氨基酸序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的6条多肽的检测试剂盒能够人工全序列合成，生产方便快捷，稳定性和特异性高，且相比传统方法检测的过程大大简化，极大地降低了成本。利用该试剂盒对分离的体外样本进行检测方便快捷，可控性和精确性均非常理想，且试剂盒操作简便。

主要参考资料

[1] 呼吸系统病学词典

[2] CN201810091934.9 一种肺炎克雷伯菌的检测试剂盒及其检测方法