血清白蛋白清除剂的应用

背景^[1-3]

血清白蛋白清除剂专门用于有效去除血清中的白蛋白。血清是研究人和动物蛋白质组的重要样本，但由于白蛋白占血清总蛋白质的60%左右，对其它低丰度蛋白的检测造成了极大的干扰，因此，有效去除占血清白蛋白是更好地鉴定其他的蛋白的先决条件之一。

人血清白蛋白作为血浆容量扩充剂用途广泛，是当前的研究热点之一。人血清白蛋白（Human Serum Albumin，简称HSA）是人血浆中的蛋白质。在体液中人血清白蛋白可以运输脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和许多治疗分子等：同时维持血液正常的渗透压。在临床上人血清白蛋白可用于治疗休克与烧伤，用于补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增容剂。

血清白蛋白清除剂

特点：

1.简单，不需要除离心机以外的特殊仪器设备，可平行处理多个样品。

2.可以放量操作。

3.高效，一次能有效去除60%左右的白蛋白，有利于检测低丰度蛋白。

4. 得到的样品与后面的研究方法（如2D电泳、mass spectrometry等）兼容。

使用方法：

1、将100μL冰浴的溶液A加入到20μL血清样品中，轻柔振荡混匀。

2、-20℃放置90分钟。

3、15000g 4℃离心20分钟。

4、小心将上清（含白蛋白部分）吸出。

5、将1mL冰浴的溶液B加入到沉淀中，振荡混匀。

6、冰上放置15分钟。

7、15000g 4℃离心20分钟。

8、小心弃上清，沉淀即去除了大部分白蛋白的血清蛋白质。

9、冷冻干燥沉淀后待用。得到的蛋白质可以直接用于PAGE电泳和MS等分析。

应用^[4][5]

用于药物与牛血清白蛋白相互作用的光学与电化学研究

通过循环伏安法（CV）制备了聚L-天冬氨酸修饰电极（PLA/GCE）和聚L-谷氨酸修饰电极（PLG/GCE）,以电化学法、荧光光谱法研究了异烟肼、抗坏血酸分别与牛血清白蛋白相互作用的电化学行为和光化学行为,通过对两种方法所得数据结果做对比,得出了体系中有关结合位点、结合常数以及结合的作用力类型等问题的数据,获得了满意的结果。

在整体研究过程中,需要重点解决的问题有:1)自制聚L-天冬氨酸修饰电极（PLA/GCE）及对其表征;2)自制聚L-谷氨酸修饰电极（PLG/GCE）及对其表征;3)异烟肼与牛血清白蛋白相互作用的电化学行为研究;4)抗坏血酸与牛血清白蛋白相互作用的电化学行为研究;5)异烟肼与牛血清白蛋白相互作用的光化学研究;6)抗坏血酸与牛血清白蛋白相互作用的光化学研究主要研究内容如下:1.采用循环伏安法（CV）,自制聚L-天冬氨酸修饰电极（PLA/GCE）研究异烟肼与牛血清白蛋白两者之间的相互作用。

用循环伏安法测得异烟肼与牛血清白蛋白的结合常数K为1.544×104 L/mol,结合位点数为1.137。实验测得,在1.00×10-95.00×10-5mol/L范围内,牛血清白蛋白浓度与异烟肼氧化峰电流的下降呈线性关系,检出限为5.0×10-10 mol/L。检测样品中的异烟肼和牛血清白蛋白,获得了较为满意的结论。

2. 采用荧光光谱法,探索异烟肼与牛血清白蛋白相互作用体系的光学性质。用荧光法测得异烟肼与牛血清白蛋白的结合常数K为1.479×104 L/mol,结合位点数为1.177。实验测得异烟肼对牛血清白蛋白是静态猝灭。在2.50×10-74.50×10-4 mol/L范围内,异烟肼浓度与牛血清白蛋白荧光强度的降低呈线性关系,检出限为1.0×10-7 mol/L。用于样品中异烟肼和牛血清白蛋白的测定,结果满意。

3. 采用循环伏安法（CV）,自制聚L-谷氨酸修饰电极（PLG/GCE）研究抗坏血酸与牛血清白蛋白两者之间的相互作用。用循环伏安法测得抗坏血酸与牛血清白蛋白的结合常数K为1.761×104 L/mol,结合位点数为1.078。在2.50×10-85.00×10-5 mol/L范围内,牛血清白蛋白浓度与抗坏血酸氧化峰电流的下降呈线性关系,检出限为1.0×10-9 mol/L。检测样品中抗坏血酸和牛血清白蛋白,获得了较为满意的结论。

4.采用荧光光谱法,探索抗坏血酸与牛血清白蛋白相互作用体系的光学性质。用荧光法测得抗坏血酸与牛血清白蛋白的结合常数K为1.884×104 L/mol,结合位点数为1.035。实验测得抗坏血酸对牛血清白蛋白是静态猝灭。在2.50×10-73.50×10-4mol/L范围内,抗坏血酸浓度与牛血清白蛋白荧光强度的降低呈线性关系,检出限为1.0×10-7 mol/L。用于样品中异烟肼和牛血清白蛋白的测定,结果满意。

参考文献

[1]A selective determination of levodopa in the presence of ascorbic acid and uric acid using a glassy carbon electrode modified with reduced graphene oxide[J].Soon-Young Yi,Jong-Hyeok Lee,Hun-Gi Hong.Journal of Applied Electrochemistry.2014(5)

[2]Differential effects of Cu（II）and Fe（III）on the binding of omeprazole and pantoprazole to bovine serum albumin:Toxic effect of metal ions on drugs[J].Yuping Zhang,Shuyun Shi,Younian Liu,Xiaoqin Chen,Mijun Peng.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2011(5)

[3]Spectrometric study of the interaction between Alpinetin and bovine serum albumin using chemometrics approaches[J].Yongnian Ni,Shuangshuang Wang,Serge Kokot.Analytica Chimica Acta.2010(2)

[4]Characterization of the baicalein–bovine serum albumin complex without or with Cu 2+or Fe 3+by spectroscopic approaches[J].Daojin Li,Mei Zhu,Chen Xu,Baoming Ji.European Journal of Medicinal Chemistry.2010(2)

[5]王婉君.药物与牛血清白蛋白相互作用的光学与电化学研究[D].淮北师范大学,2016.