SH-SY5Y细胞专用培养基的应用

背景^[1-3]

SH-SY5Y细胞专用培养基经过长期测试，可保持SH-SY5Y细胞的生长状态。SH-SY5Y细胞专用培养基中已包含SH-SY5Y细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于SH-SY5Y细胞的培养。

产品主要成分：MEM基础培养基222.5 mL；Ham's F-12基础培养基222.5 mL；特级胎牛血清50 mL；青霉素-链霉素5 mL。

细胞生长培养基是用以维持细胞生长增殖之用，含血清比例较大。生长培养基是培养细胞工作中最主要的培养用液，其组成为：基础培养基80%～90%，血清（多用胎牛血清)10%～20%，抗生素（多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL）。这是适用于一般细胞的培养基组成，为培养特定细胞，还要选择适应性培养基，可能尚需添加基本培养基中缺少或该细胞需要的成分。

SH-SY5Y细胞专用培养基

细胞维持培养基是为维持细胞缓慢生长或不死的培养基，血清含量甚少。一般细胞因缺少生长因子不能增殖，生长缓慢；但发生转化或癌细胞因自身有产生促生长增殖因子的能力，虽在血清缺少情况下仍能生长；因此维持液可用于选择发生恶性转化的细胞，其组成为：基本培养基95%，血清2%～5%，抗生素（多用青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL）。此处需注意，如培养正常细胞完全不加血清，可维持细胞不死，但时间过长细胞难免退化。

应用^[4][5]

用于Notch信号通路在MEHP影响SH-SY5Y细胞增殖和迁移中的作用及其机制研究

通过体外培养神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞并给予MEHP暴露,明确MEHP暴露对SH-SY5Y细胞增殖和迁移的影响;通过抑制Notch信号通路,探讨Notch信号通路在MEHP暴露影响SH-SY5Y细胞增殖和迁移中的作用机制,可为防治神经母细胞瘤和DEHP的健康损害提供科学依据。

方法:SH-SY5Y细胞采用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基常规培养。给予SH-SY5Y细胞梯度浓度MEHP暴露,CCK8法检测SH-SY5Y细胞存活率;根据CCK8结果确定染毒剂量与实验分组为空白对照组、溶剂对照组（0.1%DMSO）、低剂量组（10μM MEHP）、中剂量组（50μM MEHP）、高剂量组（250μM MEHP）,暴露时间为12h和24h。采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR方法检测细胞周期、凋亡关键基因C-MYC、Cyclin D1、CDK4、P27、Bax、Bcl-2 m RNA表达水平;western blot方法检测细胞周期、凋亡关键蛋白C-MYC、Cyclin D1、CDK4、P27、Bax、Bcl-2的表达水平。

采用IBM SPSS 24.0进行统计分析,MEHP暴露组和对照组多组间差异比较采用单因素方差分析（One Way ANOVA）,组间两两比较采用LSD检验法（Least-Significant Difference）,非正态数据采用秩和检验。检验水准为α=0.05。结果:1.MEHP暴露12h和24h后,各染毒剂量组SH-SY5Y细胞存活率均明显高于对照组（P<0.05）;随着暴露时间的增加,32、64、128、250、500和1000μM MEHP组细胞存活率明显升高（P<0.05）。

2. MEHP暴露12h和24h后,MEHP暴露组G1期细胞数量均显著减少（P<0.05）,MEHP组细胞S期细胞百分比增加（P<0.05）。

3. MEHP暴露12h和24h,MEHP暴露组SH-SY5Y细胞凋亡水平显著减低（P<0.05）;且24h组250μM MEHP暴露组细胞凋亡水平低于12h组（P<0.05）。

4. MEHP暴露12h和24h后,中、高剂量组C-MYC、Cyclin D1 m RNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）;CDK4和P27的m RNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。

5. MEHP暴露12h和24h后,中、高剂量组SH-SY5Y细胞Bax m RNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）;Bcl-2 m RNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。

结论:1.MEHP暴露可以调节SH-SY5Y细胞周期、抑制细胞凋亡,促进SH-SY5Y细胞增殖。2.MEHP暴露能够上调细胞周期关键蛋白C-MYC、Cyclin D1的表达,加速细胞周期,促进SH-SY5Y细胞增殖。3.MEHP暴露能够调节细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,抑制SHSY5Y细胞凋亡,促进神经母细胞瘤增殖。

参考文献

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[3]Proteolysis-targeting chimera against BCL-XL destroys tumor-infiltrating regulatory T cells.[J].Kolb Ryan,De Umasankar,Khan Sajid,Luo Yuewan,Kim MyungChul,Yu Haijun,Wu Chaoyan,Mo Jiao,Zhang Xin,Zhang Peiyi,Zhang Xuan,Borcherding Nicholas,Koppel Daniel,Fu YangXin,Zheng Song Guo,Avram Dorina,Zheng Guangrong,Zhou Daohong,Zhang Weizhou.Nature communications.2021(1)

[4]System Biology-Guided Chemical Proteomics to Discover Protein Targets of Monoethylhexyl Phthalate in Regulating Cell Cycle.[J].Xu Tengfei,Chen Liyan,Lim Yan Ting,Zhao Haoduo,Chen Hongjin,Chen Ming Wei,Huan Tao,Huang Yichao,Sobota Radoslaw Mikolaj,Fang Mingliang.Environmental science&technology.2021(3)

[5]张波.Notch信号通路在MEHP影响SH-SY5Y细胞增殖和迁移中的作用及其机制[D].吉林大学,2021.