兔子凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

兔子凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附法（ELISA）检测样本中兔子凝血酶受体(TR)的含量。

实验原理：已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

兔子凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

应用^[4][5]

用于葱白提取物防治兔创伤性下肢深静脉血栓形成的机制研究

为葱白提取物在防治DVT方面提供直接而客观的现代医学证据。

方法1.随机将新西兰白兔24只分为模型对照组、葱白治疗组和葱白防治组。按照赵学凌的方法构建兔下肢创伤性DVT模型,造模成功后,模型对照组给予生理盐水1周,葱白治疗组给予葱白提取物1周,葱白防治组造模前持续给予葱白提取物1周,造模后同葱白治疗组。

2. 检测以下指标：（1）造模前后P-选择素（CD62P）、血小板活化因子（PAF）和溶酶体膜蛋白（CD63）的变化；（2）造模前后血小板膜糖蛋白（GPⅡb/Ⅲa）及凝血酶受体-1（PAR-1）、凝血酶受体-4（PAR-4）的变化；

（3）造模前后各组活化蛋白C（APC）和血浆前体蛋白（TpP）的变化；

（4）造模前后各组凝血功能、血浆凝血酶调节蛋白（TM）和D-二聚体（D-D）的变化；

（5）造模前后组织型纤溶酶原活化剂（t-PA）、纤溶酶原活化剂抑制物（PAI）的变化；

（6）造模前后各组血液流变学的变化；

（7）造模前后血清白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）的变化；

（8）造模前后各组超氧化物岐化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的变化。

结果：大体观察模型对照组、葱白治疗组和葱白防治组造模成功后,双下肢均出现不同程度的弥散性肿胀,但防治组造模后其肿胀程度明显低于模型对照组及治疗组。造模7天后拆除石膏三组兔子均无明显的肿胀,但皮下淤血面积葱白防治组较模型对照组及葱白治疗组小,其中葱白治疗组1只和模型对照组2只兔子在拆除石膏时突然死亡,经解剖确认为肺栓塞死亡。

参考文献

[1]Thrombosis Risk Assessment as a Guide to Quality Patient Care[J].Joseph A.Caprini.Disease-a-Month.2005(2)

[2]Relation of Timing of Cardiac Catheterization to Outcomes in Patients With Non–ST-Segment Elevation Myocardial Infarction or Unstable Angina Pectoris Enrolled in the Multinational Global Registry of Acute Coronary Events[J].Gilles Montalescot,Omar H.Dabbous,Michael J.Lim,Marcus D.Flather,Rajendra H.Mehta.The American Journal of Cardiology.2005(12)

[3]Possible vascular-bed-specific role of interleukin-6 in young women with a history of myocardial infarction,lacunar cerebral infarction and deep vein thrombosis[J].Cytokine.2004(6)

[4]Enoxaparin and heparin comparison of deep vein thrombosis prophylaxis in total hip replacement patients[J].Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery.2006(1)

[5]张晨.葱白提取物防治兔创伤性下肢深静脉血栓形成的机制研究[D].湖北中医药大学,2011.