磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体的应用

背景^[1-3]

磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体是一类可以特异性结合磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶的多克隆抗体，主要用于磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶的体外检测实验。

磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶在线粒体内产生，但是线粒体内膜不允许Ac-CoA穿透，故先在线粒体中完成三羧酸循环步：草酰乙酸+Ac-CoA=柠檬酸，使用柠檬酸作为Ac-CoA的载体，跨越线粒体膜，进入细胞质或细胞核中，这个机制称为三羧酸转运体系。

磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶

柠檬酸受到柠檬酸裂解酶的作用转化为Ac-CoA，胞质中Ac-CoA是谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、HAT的辅因子的重要组成部分。核中Ac-CoA的水平调节组蛋白的乙酰化水平，从而调节相关基因的表达。

虽然ACL不是限速酶，但其在脂质和碳水化合物代谢的交叉点上的战略地位及其调节脂蛋白代谢的潜力，引起了作为治疗血脂异常的药物靶标的早期兴趣。

ATP-柠檬酸裂解酶（ACL）是一种线粒体内酶，在脂肪组织如肝脏和脂肪中表达。由于ACL是负责产生细胞溶质乙酰辅酶A的主要酶，这是胆固醇和脂肪酸从头生物合成所需的前体，抑制ACL有可能降低胆固醇和甘油三酯水平，并可能通过减少对肥胖产生影响脂肪生成因子。

ACL是一种重要的酶，对脂肪酸和胆固醇代谢有显着影响。它是在脂肪组织例如肝脏和白色脂肪组织中高度表达的胞质酶，并且位于哺乳动物胆固醇生物合成途径中HMG-CoA还原酶的上游。它通过催化乙酰辅酶A合成将脂肪酸的能量代谢与脂肪酸的产生联系起来，乙酰辅酶A合成是脂肪酸和胆固醇生物合成的基本底物。

应用^[4][5]

用于BAY11-7082通过抑制三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶磷酸化抑制乳腺癌细胞增殖并促进其凋亡研究

探讨核因子κB信号通路抑制剂BAY11-7082通过调控三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶（ACL）对MCF-7乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。

方法：选取对数生长期的MCF-7细胞,随机分为对照组和5μmol/L BAY11-7082处理组、10μmol/L LY294002处理组。采用Western blot法检测BAY11-7082和LY294002处理后MCF-7细胞中ACL、磷酸化的ACL（p-ACL）、磷酸化的Akt（p-Akt）、磷酸化的核因子κB（p-NF-κB）的蛋白水平。

采用BAY11-7082和小干扰RNA敲低ACL（si ACL）,CCK-8法检测MCF-7细胞的增殖、异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶（annexinⅤ-FITC/PI）双标记结合流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡。

结果：BAY11-7082能抑制MCF-7细胞增殖,且呈剂量依赖性。Werstern blot结果显示BAY11-7082处理MCF-7细胞48 h后,p-NF-κB和p-ACL明显下降;LY294002处理组中,p-Akt和p-ACL明显下降。CCK-8实验和流式细胞术检测结果显示,BAY11-7082和si ACL分别处理MCF-7细胞48 h后,细胞增殖减少,细胞凋亡明显增加。

结论：BAY11-7082能通过抑制ACL的磷酸化从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖并促进其凋亡。

参考文献

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[3]Inhibition of ATP citrate lyase induces triglyceride accumulation with altered fatty acid composition in cancer cells[J].Toshiro Migita,Sachiko Okabe,Kazutaka Ikeda,Saori Igarashi,Shoko Sugawara,Akihiro Tomida,Tomoyoshi Soga,Ryo Taguchi,Hiroyuki Seimiya.Int.J.Cancer.2014(1)

[4]Akt-Dependent Metabolic Reprogramming Regulates Tumor Cell Histone Acetylation[J].Joyce V.Lee,Alessandro Carrer,Supriya Shah,Nathaniel W.Snyder,Shuanzeng Wei,Sriram Venneti,Andrew J.Worth,Zuo-Fei Yuan,Hee-Woong Lim,Shichong Liu,Ellen Jackson,Nicole M.Aiello,Naomi B.Haas,Timothy R.Rebbeck,Alexander Judkins,Kyoung-Jae Won,Lewis A.Chodosh,Benjamin A.Garcia,Ben Z.Stanger,Michael D.Feldman,Ian A.Blair,Kathryn E.Wellen.Cell Metabolism.2014(2)

[5]黄云秀,苏敏,魏兰,季飞虎,王念,钟昌莉,陈婷梅.BAY11-7082通过抑制三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶磷酸化抑制乳腺癌细胞增殖并促进其凋亡[J].细胞与分子免疫学杂志,2015,31(11):1458-1462.