人DNA修复基因XRCC1(XRCC1)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人DNA修复基因XRCC1(XRCC1)ELISA试剂盒 采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测样品中人DNA修复基因XRCC1(XRCC1)的含量。

实验原理：将标准品、待测样本加入到预先包被DNA修复基因XRCC1(XRCC1)透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中DNA修复基因XRCC1(XRCC1)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中DNA修复基因XRCC1(XRCC1)含量。

人DNA修复基因XRCC1(XRCC1)ELISA试剂盒

操作步骤

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

7、温育：重复4的操作。

8、洗板：重复5的操作。

9、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，37℃避光显色15min。

10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

应用^[4][5]

用于DNA修复基因XRCC1和XRCC3在结直肠癌中的表达及其多态性与化疗后患者生存期关系的研究

分别检测原发性中晚期结直肠癌患者中XRCC1、XRCC3的表达状况及其SNP,同时检测与肿瘤细胞增殖密切相关的抗原Ki-67在肿瘤中的表达,探讨EBR和HR修复在中晚期结直肠癌中的作用以及与Ki-67之间的关系以及XRCC1、XRCC3的SNP和铂类药物化疗疗效的关系,希望为中晚期结直肠癌患者的个体化用药提高疗效提供一定的理论依据。

XRCC1、XRCC3、Ki-67在结直肠癌中的蛋白表达与临床因素的相关性目的通过检测XRCC1、XRCC3及Ki-67在结直肠癌组织和正常肠粘膜组织中的表达状况,以探讨它们在结直肠癌中的作用以及相互之间的关系。

方法：应用免疫组织化学方法检测432例结直肠癌组织和与其匹配的切缘正常肠粘膜组织中XRCC1、XRCC3和Ki-67的表达情况,并分析三者在结直肠癌发生发展中的作用以及其与结直肠癌患者各临床病理学参数之间的关系。

结果XRCC1、XRCC3、Ki-67在结直肠癌组织中的表达显著高于正常肠粘膜组织,具有统计学意义（P<0.05）。结直肠癌组织中XRCC3与Ki-67蛋白的表达阳性率呈正相关（P<0.05）。XRCC1、XRCC3、Ki-67在结直肠癌组织中的表达与患者年龄、性别、组织学分级、临床分期之间均无显著相关性（P>0.05）。

结论（1）结直肠癌组织中XRCC1蛋白表达上调。

（2）结直肠癌组织中XRCC3蛋白表达上调。

（3）结直肠癌组织中Ki-67蛋白表达显著上调。

（4）结直肠癌组织中XRCC1、XRCC3蛋白表达无相关性,提示其修复功能的独立性。

（5）结直肠癌组织中Ki-67蛋白与XRCC3蛋白表达呈正相关,提示两者在结直肠癌的发生发展中可能有协同作用。

（6）XRCC1、XRCC3、Ki-67在结直肠癌组织中的表达与患者年龄、性别、组织学分级、临床分期之间均无显著相关性。

参考文献

[1]c-Myc enhances colon cancer cell-mediated angiogenesis through the regulation of HIF-1α[J].Cheng Chen,Shaoxin Cai,Guihua Wang,Xiaonian Cao,Xi Yang,Xuelai Luo,Yongdong Feng,Junbo Hu.Biochemical and Biophysical Research Communications.2012

[2]Association between the XRCC3 polymorphisms and breast cancer risk:meta-analysis based on case–control studies[J].Xiao-Feng He,Wu Wei,Jiao Su,Zi-Xuan Yang,Yi Liu,Ying Zhang,Da-Peng Ding,Wei Wang.Molecular Biology Reports.2012(5)

[3]XRCC1 Arg194Trp polymorphism,risk of nonmelanoma skin cancer and extramammary Paget’s disease in a Japanese population[J].Koji Chiyomaru,Tohru Nagano,Chikako Nishigori.Archives of Dermatological Research.2012(5)

[4]Association of Cytidine Deaminase and Xeroderma Pigmentosum Group D Polymorphisms with Response,Toxicity,and Survival in Cisplatin/Gemcitabine-Treated Advanced Non-small Cell Lung Cancer Patients[J].Vienna Ludovini,Irene Floriani,Lorenza Pistola,Vincenzo Minotti,Marialuisa Meacci,Rita Chiari,Daniela Garavaglia,Francesca Romana Tofanetti,Antonella Flacco,Annamaria Siggillino,Elisa Baldelli,Maurizio Tonato,Lucio Crinò.Journal of Thoracic Oncology.2011(12)

[5]刘杨.DNA修复基因XRCC1和XRCC3在结直肠癌中的表达及其多态性与化疗后患者生存期关系的研究[D].中南大学,2013.