营养琼脂培养基的应用

背景^[1-3]

营养琼脂培养基其实就是一种无选择性的较低营养成分的固体培养基，主要用于细菌菌落计数，也可以用于细菌的传代和增菌，但一般不用于细菌的鉴定（除非该细菌菌落有比较特殊的形态特征）。

适合营养要求不高的细菌生长，比如葡萄球菌属（如金葡菌）、肠球菌属、肠杆菌科细菌（如大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、变形杆菌等）、非发酵菌（如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等）、炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌等。但链球菌属、奈瑟菌属、苛养菌（比如流感嗜血杆菌、肺炎军团菌）、厌氧菌等营养要求较高甚至苛刻的细菌难以培养，需要添加其他成分。

营养琼脂培养基

成分(g/L)：蛋白胨10.0；牛肉浸出粉3.0；氯化钠5.0；琼脂14.0；pH值7.2±0.2；25℃。

检验原理：蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源，氯化钠能维持均衡的渗透压，琼脂是培养基的凝固剂。

用法：称取本品干粉29g,加入1L蒸馏水或去离子水。搅拌加热煮沸至完全溶解121℃15min高压蒸汽灭菌,冷至约50℃,于121℃高压灭菌15min,冷却至50℃左右时,用11mol/L的硫酸调节pH至4.0,混匀,倾注平板。(注:配制不同用量体积,可按比例扩增或缩小。)取0.1mL样品液或培养液接种至此平板表面,于45±2℃培养3-5d。

应用^[4][5]

用于臭氧水对骨科感染性创面常见耐药菌灭菌作用的初步实验研究

观察臭氧水对骨科感染性创面常见的四种耐药菌，即耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、产β-内酰胺酶（ESBLS）大肠埃希菌、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的体外灭菌效果，为臭氧水治疗临床骨科创面相关耐药菌感染提供初步的理论依据。

方法：实验一：用臭氧发生器制取三种浓度为2.5ug/ml、5ug/ml和10ug/ml臭氧水（温度20±1℃）各六次，立即用碘量法检测其浓度；并检测10ug/ml臭氧水分别在0、1、2、4、8、16、32、64和128min时浓度值；

实验二：用臭氧发生器制取浓度分别为2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml臭氧水后，取4.5ml臭氧水六次对0.5ml耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌悬液进行体外定量灭菌，分别作用0、0.5、1、2、4、8及16min时后，吸取0.5ml臭氧水作用的混合液，加入4.5ml中和剂中，振荡5min后，取10ul中和后的混合液接种于普通营养琼脂培养基上，在温室培养箱中培养24h，进行菌落计数，并计算灭菌率；用10ug/ml臭氧水对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外灭菌分别作用0、2、4、8和16min后，加入中和剂，经3200r/min离心15min，弃上清液，再加入磷酸盐缓冲液1ml混悬5min，取等量混悬液和3%磷钨酸染色2min后，滴于铜网上，待干燥后，在透射电子显微镜下观察菌体超显微结构变化情况；

实验三：用臭氧发生器制取浓度分别为2.5ug/ml、5ug/ml和10ug/ml臭氧水，取4.5ml臭氧水分别六次对0.5ml产β-内酰胺酶大肠埃希菌菌悬液进行体外定量灭菌，分别作用0、0.5、1、2、4、8及16min时后，吸取0.5ml臭氧水作用的混合液，加入4.5ml中和剂中，振荡5min后，取10ul中和后的混合液接种于普通营养琼脂培养基上，在温室培养箱中培养24h，进行菌落计数，并计算灭菌率；用10ug/ml臭氧水对产β-ESBLS大肠埃希菌体外灭菌分别作用0、2、4、8和16min后，加入中和剂，经3200r/min离心15min，弃上清液，再加入磷酸盐缓冲液1ml混悬5min，取等量混悬液和3%磷钨酸染色2min后，滴于铜网上，待干燥后，在透射电子显微镜下观察菌体超显微结构变化情况；

参考文献

[1]Application of ozone in the treatment of periodontal disease[J].Adusumilli Srikanth,Manthena Sathish,Anumolu Sri Harsha.Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences.2013(5)

[2]Ozone therapy:A clinical review[J].A Elvis,J Ekta.Journal of Natural Science,Biology and Medicine.2011(1)

[3]Extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii:risk factors for acquisition and prevalent OXA-type carbapenemases—a multicentre study[J].Yoon Soo Park,Hyukmin Lee,Kkot Sil Lee,Seung Sik Hwang,Yong Kyun Cho,Hyo Youl Kim,Young Uh,Bum Sik Chin,Sang Hoon Han,Seok Hoon Jeong,Kyungwon Lee,June Myung Kim.International Journal of Antimicrobial Agents.2010(5)

[4]Antibacterial effect of ozone on cariogenic bacterial species[J].E.Johansson,R.Claesson,J.W.V.van Dijken.Journal of Dentistry.2009(6)

[5]赵继.臭氧水对骨科感染性创面常见耐药菌灭菌作用的初步实验研究[D].湖北中医药大学,2014.