人肾小球系膜细胞的应用

背景^[1-3]

人肾小球系膜细胞分离自肾小球组织采用机械研磨法结合不同孔径不锈钢网筛过滤后使用胶原酶消化制备而来；细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

人肾小球系膜细胞又称间充质细胞、血管系膜细胞、球内系膜细胞、毛细血管间细胞或深部内皮细胞。肾小球系膜细胞是一种肾小球固有细胞，位于肾小球毛细血管袢之间，邻接内皮细胞或基底膜，形态不规则，细胞突起可深至内皮细胞和基底膜之间，或经内皮细胞之间伸入毛细血管腔内。肾小球系膜细胞具有分泌细胞基质、产生细胞因子、支撑肾小球毛细血管丛、吞噬和清除大分子物质以及类似平滑肌细胞收缩的功能。

人肾小球系膜细胞

肾小球系膜细胞呈星形，有多个突起，有丰富的细胞质。位于肾小球的中轴区，分布于毛细血管簇中的毛细血管之间。主要功能包括维持肾小球毛细血管网结构的完整性，调节肾小球滤过率，分泌多种细胞生长因子如转化生长因子β、血小板源性生长因子以及肾素等生物活性物质，从而发挥多种生物学功能。入球小动脉与出球小动脉在进出肾小球处与肾小球系膜细胞相连接，因此肾小球系膜细胞的收缩活动可增强小动脉的收缩作用，从而控制肾小球内血液分流。

应用^[4][5]

用于黄芪甲苷对高糖诱导人肾小球系膜细胞损伤的保护作用及其机制研究

在体外，研究高糖诱导人肾小球系膜细胞（Human Mesangial Cell,HMC）损伤作用及黄芪甲苷（Astragalosides IV，As-IV）对其的保护作用，探讨糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）发病机制与As-IV防治DN可能的作用机制，从而为As-IV的临床应用提供更多的理论依据。

方法：1.将HMC培养于含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中，置于5%CO2，37℃培养箱中常规培养，取对数生长期的细胞进行实验。

2. 将常规培养的HMC随机分为9组：正常糖组（NG，5.5mmol/L葡萄糖）；渗透压对照组（NG+MA，5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇）；高糖组（HG，30mmol/L葡萄糖）；Tempol组（含100μmol/L Tempol高糖DMEM培养液）；

TGF-β阻断剂SB431542组（含10μmol/L SB431542高糖DMEM培养液）；As-IV不同浓度干预组（分别为12.5，25，50，100μmol/LAs-IV高糖DMEM培养液）。

另设立正常糖组细胞，并用不同浓度（12.5，25，50，100μmol/L）As-IV进行干预。各组细胞孵育48h后，用倒置显微镜观察HMC生长状况，各组细胞增殖情况采用MTT比色法检测。

根据检测结果，选择药物作用剂量，并排除渗透压对细胞的影响。

3.根据MTT的检测结果，将常规培养的HMC随机分为7组：正常组（NG），高糖组（HG）,Tempol组（100μmol/L），SB431542组（10μmol/L SB431542），As-IV低，中，高剂量组（25，50，100μmol/LAs-IV）。各干预因素处理48h后，采用酶联免疫吸附剂测定（Enzyme-linked immunosorbent assaym,ELISA）法检测各组细胞上清液中IV型胶原（collagen typeⅣ，ColⅣ）、基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9，MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制物-1（tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1，TIMP-1）的含量。

参考文献

[1]Transforming growth factor-βsignalling:Role and consequences of Smad linker region phosphorylation[J].Danielle Kamato,Micah L.Burch,Terrence J.Piva,Hossein Babaahmadi Rezaei,Muhamad Ashraf Rostam,Suowen Xu,Wenhua Zheng,Peter J.Little,Narin Osman.Cellular Signalling.2013(10)

[2]Diabetic Neuropathy[J].Aaron I.Vinik,Marie-Laure Nevoret,Carolina Casellini,Henri Parson.Endocrinology and Metabolism Clinics of North America.2013

[3]Regulation of Autophagy by TGF-β:Emerging Role in Kidney Fibrosis[J].Yan Ding,Mary E.Choi.Seminars in Nephrology.2013

[4]TGFβ1-dependent podocyte dysfunction[J].Michal Herman-Edelstein,Talia Weinstein,Uzi Gafter.Current Opinion in Nephrology and Hypertension.2013(1)

[5]熊莉.黄芪甲苷对高糖诱导人肾小球系膜细胞损伤的保护作用及其机制研究[D].安徽医科大学,2014.