兔Β淀粉样蛋白1-40(AΒ1-40)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

兔Β淀粉样蛋白1-40(AΒ1-40)ELISA试剂盒用于测定兔血清，血浆及相关液体样本中β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）的含量。

兔Β淀粉样蛋白

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）水平。用纯化的兔β淀粉样蛋白1-40抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β淀粉样蛋白1-40抗原，再与HRP标记的羊抗兔抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）抗原浓度。

Amyloidβ-Protein(1-40)(mouse,rat)是一种由淀粉样前体蛋白裂解后产生的一种容易聚集的多肽产物。在一些的动物实验中，Amyloidβ-Protein(1-40)(mouse,rat)是阿尔茨海默病脑内老年斑块的主要组成部分。

与人体内β-淀粉样蛋白的序列相比，改变了三个氨基酸，将Arg换成Gly，Tyr换成Phe，将His换成Arg。实验证明，序列的改变，让Amyloidβ-Protein(1-40)(mouse,rat)在老鼠体内需要更长的时间才能找the platform hidden under the water。另外Amyloidβ-Protein(1-40)更易沉积于脉管系统，导致淀粉样脑血管病，虽然相比于Amyloidβ-Protein(1-42)，前者拥有更好的水溶性。

应用^[4][5]

用于京尼平苷调节β淀粉样蛋白神经毒性及其代谢的分子机制研究

京尼平苷可明显抑制Aβ1-42诱导的神经毒性,而且京尼平苷的这种神经保护作用与其调节激活GLP-1受体、上调Aβ降解关键酶-胰岛素降解酶（Insulin-degrading enzyme,IDE）的表达水平有关。

随后,利用酶活性抑制阻断的方法在原代培养的皮层神经元中考察了京尼平苷调节IDE表达的细胞信号转导途径。实验发现,PKA抑制剂（H89）、EGFR抑制剂（AG1478）、PI3K抑制剂（LY294002）、c-Src抑制剂（PP1）以及PPARγ拮抗剂（GW9662）均可明显抑制京尼平苷对IDE基因表达的上调作用,表明京尼平苷上调IDE表达与上述信号通路有关。

进一步研究发现,京尼平苷还可以增强PPARγ磷酸化,加速磷酸化Fox O1从胞核转运到胞浆,从而解除对IDE基因启动子活性的抑制,间接增强IDE基因表达。

其次,为了探索京尼平苷对Aβ代谢和tau磷酸化的影响及其分子机制,利用ELISA和Western blot方法测定了京尼平苷对链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）诱导的胰岛素缺陷动物脑内Aβ和tau磷酸化水平的影响,以及京尼平苷对脑内胰岛素信号的调节作用。

结果显示,京尼平苷可明显降低胰岛素缺陷诱导的Aβ1-42的生成和tau磷酸化,而且京尼平苷抑制Aβ1-42生成与其上调胰岛素信号调节Aβ分泌酶的表达水平有关。最后,在原代培养的皮层神经元中考察了胰岛素信号在京尼平苷调节Aβ1-42生成和tau磷酸化过程中的作用及细胞信号转导过程。

结果发现,京尼平苷可增强胰岛素信号介导的Akt磷酸化,上调ADAM10（α分泌酶）、抑制BACE1（β分泌酶）表达,进而减少Aβ1-42的产生;同时,京尼平苷还可通过增强GSK-3β磷酸化,降低tau蛋白磷酸化水平。

参考文献

[1]Geniposide Plays an Anti-inflammatory Role via Regulating TLR4 and Downstream Signaling Pathways in Lipopolysaccharide-Induced Mastitis in Mice[J].Xiaojing Song,Wen Zhang,Tiancheng Wang,Haichao Jiang,Zecai Zhang,Yunhe Fu,Zhengtao Yang,Yongguo Cao,Naisheng Zhang.Inflammation.2014(5)

[2]The Alzheimer Pandemic:Is Paracetamol to Blame?[J].Günther Robert Norman Jones.Inflammation&Allergy-Drug Targets.2014(1)

[3]Geniposide Attenuates Oligomeric Aβ1-42-Induced Inflammatory Response by Targeting RAGE-Dependent Signaling in BV2 Cells[J].Cui Lv,Lei Wang,Xiaoli Liu,Xiao Cong,Shirley ShiDu Yan,Yongyan Wang,Wensheng Zhang.Current Alzheimer Research.2014(5)

[4]Geniposide Attenuates Mitochondrial Dysfunction and Memory Deficits in APP/PS1 Transgenic Mice[J].Cui Lv,Xiaoli Liu,Hongjuan Liu,Tong Chen,Wensheng Zhang.Current Alzheimer Research.2014(6)

[5张永兰.京尼平苷调节β淀粉样蛋白神经毒性及其代谢的分子机制[D].重庆大学,2015.