高迁移率族蛋白A1抗体的应用

背景^[1-3]

高迁移率族蛋白A1抗体是一类可以特异性结合高迁移率族蛋白A1的多克隆抗体。主要用于高迁移率族蛋白A1的体外免疫学实验。

高迁移率族蛋白(high mobility group protein，HMG蛋白)广泛存在于真核生物细胞中，因其在聚丙烯凝胶电泳中的高迁移率而得名。HMG蛋白是真核细胞基因调控的动力体现者，是真核细胞内继组蛋白之后含量最为丰富的一组染色质蛋白质，它们在染色质的结构与功能及基因表达调控过程中均发挥着重要作用。HMG蛋白家族可分为HMGA、HMGB和HMGN三类亚家族。生物化学与分子生物学，氨基酸、多肽与蛋白质。

高迁移率族蛋白A1免疫组化图

根据分子质量大小、序列相似性和DNA结构特性，HMG可进一步分为HMGA、HMGB、HMGN 3个家族。而HMGB家族又有3个成员，即HMGB1、HMGB2和HMGB3，三者在氨基酸序列上有80%的一致性。HMGB1是含量最丰富的HMG蛋白，在典型的哺乳动物细胞内约有106个分子，平均10～15个核小体即可含有1个HMGB1分子。

HMGB1广泛分布于淋巴组织、脑、肝、肺、心、脾、肾等组织中，HMGB1除在肝、脑组织中主要存在于胞浆外，在大多数组织中存在于胞核；而HMGB2/3分布较局限，HMGB2仅分布在睾丸和淋巴组织中，HMGB3仅在胚胎中被发现，二者可能与胚胎发育有关。HMGB1先前也称HMG1，在进化过程中其氨基酸序列高度保守，啮齿类动物与人的氨基酸序列同源性高达98%以上，小鼠与大鼠氨基酸序列同源性更是高达100%。

应用^[4][5]

用于高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、凋亡及自噬的作用研究

通过研究系统阐述高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞体外增殖、凋亡及自噬水平的调控。

方法1类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞分离培养及鉴定。

1.1非选择性选取类风湿性关节炎患者10例,消化酶培养法及组织块培养法培养所取滑膜组织。

1.2光学显微镜观察及波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学染色鉴定所培养样本,观察其是否为类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞并探讨其培养方式。

2高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖的影响。

2.1 PI染色后经流式细胞仪分析各组细胞S/G2变化,探讨高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物作用下细胞分裂相的改变。

2.2 CCK-8法检测各组细胞增殖情况,观察高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物影响下细胞增殖改变。

3高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响。

3.1 Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡情况,探讨高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物作用下细胞早期凋亡率与总凋亡率变化。

3.2 Western blot检测Bax、Bcl-2的灰度比值的变化,观察高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物影响下细胞凋亡相关蛋白表达改变。

4高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞自噬的影响。

4.1 Western blot检测LC3II的表达差异,探讨高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物复合物对自噬蛋白表达的作用。

4.2免疫荧光染色,荧光显微镜观察自噬相关蛋白LC3II的表达情况,观察高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对自噬蛋白表达的影响。

结果1.采用消化酶法以及组织块培养法培养所取材原代细胞,两种方法无明显差异,光学显微镜观察并Vimentin免疫组织化学鉴定所取材及培养的细胞为实验所需的类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞。

2.高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物干预类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞48h后,PI染色实验与CCK-8实验结果显示高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物组类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖明显,处于S/G2期细胞明显增多,差异有统计学意义。

参考文献

[1]Local fibroblast proliferation but not influx is responsible for synovial hyperplasia in a murine model of rheumatoid arthritis[J].Yusuke Matsuo,Fumitaka Mizoguchi,Tetsuya Saito,Kimito Kawahata,Satoshi Ueha,Kouji Matsushima,Yutaka Inagaki,Nobuyuki Miyasaka,Hitoshi Kohsaka.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2016(3)

[2]Serum Markers in Rheumatoid Arthritis:A Longitudinal Study of Patients Undergoing Infliximab Treatment[J].Oddgeir Selaas,Hilde H.Nordal,Anne-Kristine Halse,Johan G.Brun,Roland Jonsson,Karl A.Brokstad,Bruce M.Rothschild.International Journal of Rheumatology.2015

[3]The Autoimmunity-Associated Gene CLEC16A Modulates Thymic Epithelial Cell Autophagy and Alters T Cell Selection[J].Cornelia Schuster,Kay D.Gerold,Kilian Schober,Lilli Probst,Kevin Boerner,Mi-Jeong Kim,Anna Ruckdeschel,Thomas Serwold,Stephan Kissler.Immunity.2015(5)

[4]Activation of the High-Mobility Group Box 1 Protein-Receptor for Advanced Glycation End-Products Signaling Pathway in Rats During Neurogenesis After Intracerebral Hemorrhage[J].Chunyan Lei,Bo Wu,Tian Cao,Shuting Zhang,Ming Liu.Stroke.2015(2)

[5]刘伟.高迁移率族蛋白1-白细胞介素1β复合物对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、凋亡及自噬的作用研究[D].内蒙古医科大学,2019.