猫Α干扰素(IFN-Α)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

猫Α干扰素(IFN-Α)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猫α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒水平。

原理：用纯化的猫α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒,再与HRP标记的α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中猫α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒浓度。

ELISA流程

干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。

天然干扰素分为三种多肽：IFN-α、IFN-β及IFN-γ。IFN-α和IFN-β分别由白细胞和成纤维细胞产生，在酸性环境中稳定，并且结合相同的受体。而IFN-γ主要由T淋巴细胞分泌，对酸不稳定，结合的受体与前两者不同，IFN-γ的免疫刺激活性在三者中最强。IFN-β和IFN-γ只由单个基因编码，而IFN-α由至少23个不同基因。

应用^[4][5]

用于猫α和ω干扰素的原核表达及抗病毒活性测定

扰素（IFN）是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子,在特定的诱生剂作用下,通过细胞基因组控制产生的一类糖蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调控等多种生物学活性。干扰素具体可以分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种类型。Ⅰ型干扰素具有抗病毒和抗肿瘤作用,直接影响到人类和动物病毒病的免疫防治等,具有广阔的临床应用前景。

根据GeneBank上收录的猫α和ω干扰素基因序列,检测其信号肽部分并去除,得到编码成熟蛋白的序列,依照大肠杆菌密码子的兼并性及密码子的偏好性,以不改变氨基酸排列顺序和组成为前提,改造已知的基因序列,用大肠杆菌偏好的密码子替换原有的密码子,得到新的编码猫α和ω干扰素的基因序列,长度分别为510bp和525bp,之后在序列两端添加BamHⅠ和HindⅡ的酶切位点,送生物公司进行全基因合成,并连接至原核表达载体pET-32a中,得到两个重组原核表达质粒pET32a-FeIFN-α和pET32a-FeIFN-ω,转化宿主菌BL21（DE3）感受态细胞中。

用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,两个重组质粒均得到了高效表达,融合蛋白的分子质量均在33kD左右,以包涵体的形式存在。经过菌体破碎、包涵体的洗涤、溶解变性和透析复性后得到了较纯的重组猫α和ω干扰素。

参考文献

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[4]The SOCS box:a tale of destruction and degradation[J].Benjamin T Kile,Brenda A Schulman,Warren S Alexander,Nicos A Nicola,Helene M.E Martin,Douglas J Hilton.Trends in Biochemical Sciences.2002(5)

[5]仇婧.猫α和ω干扰素的原核表达及抗病毒活性测定[D].南京农业大学,2013.