人肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)ELISA KIT可用于体外测定人血清、血浆及相关液体样本中肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)含量。原理应用双抗体夹心法测定标本中人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)水平。

用纯化的人肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)，再与HRP标记的肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肠脂肪酸结合蛋白（iFABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肠肪酸结合蛋白（iFABP)浓度。

人肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于肠脂肪酸结合蛋白和二胺氧化酶与窒息新生儿胃肠功能障碍关系的研究

通过测定轻、重度窒息新生儿生后第1、5天血I-FABP、DAO的水平变化，及与胃肠功能障碍评分的相关性，从而了解窒息新生儿缺氧缺血后早期胃肠功能障碍情况，必要时及早进行干预，将病情控制在早期阶段，为危重症的救治争取时机。

方法：选择窒息新生儿50例（实验组），根据新编七版儿科学Apgar评分标准将入选病例分为轻度窒息组和重度窒息组，其中轻度窒息组30例、重度窒息组20例；对照组为同期住院的无缺氧、感染、先天性疾病、胃肠道反应的新生儿20例，并记录入选新生儿胎龄、分娩方式、体重、性别等相关临床资料以进行对比分析。

同时所选病例均无如下相关疾病：①早产儿；②重要脏器先天畸形（心肾脑）；③先天性胃肠道疾病；④感染性疾病。胃肠功能障碍诊断标准依据：腹胀、肠鸣音减弱或消失、咖啡样呕吐物这三大主要症状、体征。

胃肠功能障碍评分依据1995年全国危重病会议制定的标准（见Table17）。新生儿均于生后第1天（24h）、第5天抽取静脉血1.0mL，注入肝素抗凝管，3000r/min离心15min，分离出血浆，置-70℃冰箱保存待测。

采用酶联免疫吸附测试法及比色法，对采集的血浆标本做ＤAO及I-FABP的水平测定。所有实验数据均采用SPSS13.0软件进行统计学分析，计量资料结果采用均数±标准差（X±S）表示，计数资料结果采用率（%）表示。

多组均数比较采用单因素方差分析（方差齐），组间多重比较用SNK法；指标的相关性分析采用直线相关分析，灵敏度、特异度比较采用ROC曲线分析。检验水平α=0.05，P<0.05视为差异有统计学意义（相关性分析中检验水平α=0.01，P<0.01视为差异有统计学意义）。

参考文献

[1]Tissue-specific functions in the fatty acid-binding protein family.[J].Storch Judith,Thumser Alfred E.The Journal of biological chemistry.2010(43)

[2]Non-Invasive Markers for Early Diagnosis and Determination of the Severity of Necrotizing Enterocolitis[J].Geertje Thuijls,Joep P.M.Derikx,Kim van Wijck,Luc J.I.Zimmermann,Pieter L.Degraeuwe,Twan L.Mulder,David C.Van der Zee,Hens A.A.Brouwers,Bas H.Verhoeven,L.W.Ernest van Heurn,Boris W.Kramer,Wim A.Buurman,Erik Heineman.Annals of Surgery.2010(6)

[3]Localization,function and regulation of the two intestinal fatty acid-binding protein types[J].Histochemistry and Cell Biology.2009(3)

[4]Comparison of Epidermal Growth Factor and Heparin-binding Epidermal Growth Factor–like Growth Factor for Prevention of Experimental Necrotizing Enterocolitis[J].Bohuslav Dvorak,Ludmila Khailova,Jessica A Clark,Dania Molla Hosseini,Kelly M Arganbright,Charity A Reynolds,Melissa D Halpern.Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition.2008(1)

[5]王叶青.肠脂肪酸结合蛋白和二胺氧化酶与窒息新生儿胃肠功能障碍关系的研究[D].河北医科大学,2012.