荧光黄的制备

背景及概述^[1][2]

荧光黄（英语：Fluorescein，又称为荧光素）是一种合成有机化合物，外观为暗橙色/红色粉末，可溶于乙醇，微溶于水。工业荧光素一般是从间苯二酚和苯酐热缩合而得，其中含有大量的杂质，主要有未反应的间苯二酚以及酚酞及丫啶黄等，传统的荧光素提纯方法是用荧光素溶于碱液中，用活性碳吸附杂质，再酸化析出荧光素，然后重复多次碱溶、酸化、过滤洗涤的过程。该工艺虽然可得到符合药典要求的产物，但是用HPLC或薄层分析即可发现，仍有一些极性比较强的杂质未被除去。问题的关键是，这些杂质在碱性条件下易溶于水，此时活性炭对其吸附性明显降低，而在酸性条件下，这些杂质又很容易和荧光素共沉淀。所以用传统方法很难得到高纯度的荧光素。

荧光黄

应用^[3]

制备荧光黄钠

用甲醇重结晶荧光黄，得到结晶在150‑160℃℃干燥以除去结晶甲醇，此时荧光黄变成暗红色固体，然后准确秤取1.66kg（5mol）纯的荧光黄和0.535kg纯的碳酸钠。至小型蒸发釜内用5L水溶解，蒸发至干，得到淡黄橙色物质，即为荧光黄钠。经检测，荧光黄钠的产率为1.9公斤。。

制备^[2]

①将11kg间苯二酚、7.4kg邻苯二甲酸酐混合，经升温150℃融化后，在不断搅拌下加入5g粉末状无水氯化锌，当温度升到170‑185℃时开始反应，搅拌半小时完全溶解，并将温度逐渐升高到210‑220℃时保温4h，物质开始变稠，冷却后固化，将固化物粉碎加入热水煮沸2h，以除去残留的氯化锌和间苯二酚，用布氏漏斗过滤沉淀，水洗干燥，得粗品荧光黄；

②将16kg粗品溶于50L浓度为5％的碳酸钠水溶液中，加热溶解，用活性炭脱色并过滤，滤液用稀盐酸中和pＨ至2‑3，析出结晶，过滤出结晶并洗涤，于80℃烘干，得荧光黄。

提纯^[2]

称取荧光素粗品100g于1000ml三口烧瓶中，加入冰乙酸430ml，乙酸酐73.5g(0.72mol)、吡啶34ml，搅拌加热回流至荧光素全部溶解，继续搅拌反应30分钟，得浅橙色溶液。冷却到室温，析出片状晶体，过滤，用冷甲醇洗涤至近无色，再用50ml乙醚洗涤。所得固体于50～60℃干燥至恒重，得到纯品双乙酰荧光素101.2g。(产率：81.0％)mp：203～205℃。薄层显示为单一点。

将纯品双乙酰荧光素100g(0.24mol)加入到1000ml三口烧瓶中，加入266ml甲醇，搅拌均匀，慢慢加入257g21％甲醇钠溶液(1.00mol)，充分搅拌反应至固体物质完全溶解，得红色溶液，继续搅拌反应30分钟，然后慢慢加入300ml36％乙酸，搅拌反应5小时，过滤，用50ml冷甲醇洗涤，再用水洗涤至浅黄色。所得固体于100℃、30mmHg真空干燥至恒重，得纯品荧光素73.4g，产率：92.0％。薄层分析显示为单一物质，HPLC纯度99.8％。

主要参考资料

[1] 翟保京, 侯建龙, 王贤瑞, & 贾景文. (2005). 雷马素荧光黄fl性能研究. 印染, 31(019), 26-28.

[2] 朱铿, & 童沈阳. (1996). 荧光黄与蛋白质相互作用的研究. 高等学校化学学报(04), 539-542.

[3] 盛丽, 王海霞, 苏碧泉, 刘改兰, & 朱金林. (2008). β-环糊精与荧光黄的包合作用. 光谱实验室(05), 122-124.