人骨骼肌细胞的应用

背景^[1-3]

人骨骼肌细胞分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。

依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。

两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞，细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。

骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

应用^[4][5]

用于TLR4在脂肪酸诱导人骨骼肌细胞胰岛素抵抗中作用的研究

选用人骨骼肌细胞作为对象，研究TLR4的表达水平对炎症因子活性和胰岛素抵抗的影响，以及脂肪酸对TLR4活性及其下游炎症因子的影响。

方法：1.棕榈酸和DHA（100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L）干预人骨骼肌细胞4h，8h，12h，24h后，用MTT法测定其对骨骼肌细胞增殖的影响。棕榈酸和DHA干预人骨骼肌细胞24h后，用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）测定细胞培养液中葡萄糖含量；用Western Blot法检测TLR4，MyD88，CRP的表达；Real-time PCR法检测TLR4，MyD88，CRP，TNF-α，IL-6mRNA的表达。

2. 用LPS和PMB分别作用人骨骼肌细胞24h，用Western Blot法检测TLR4，MyD88的表达；Real-time PCR法检测TLR4，MyD88，CRP，TNF-α，IL-6mRNA的表达；用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）测定细胞培养液中的葡萄糖含量。

研究结果：1.棕榈酸作用于人骨骼肌细胞，与对照组比较，其葡萄糖摄取能力明显下降（P<0.05），TLR4及其下游炎症因子TNF-α，IL-6，CRP表达均明显增高（P<0.05）;但TLR4下游适配分子MyD88mRNA显著增高（P<0.05），但蛋白水平没有明显差异（P>0.05）。相反，DHA作用的人骨骼肌细胞均没有明显变化。

2.TLR4高表达组的炎症因子TNF-α，IL-6，CRP及MyD88的表达明显高于对照组（P<0.05），其葡萄糖摄取能力明显下降（P<0.05）；TLR4低表达组的炎症因子TNF-α，IL-6，CRP及MyD88的表达明显低于对照组（P<0.05）。，其葡萄糖摄取能力没有显著变化（P>0.05）。

参考文献

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