绿脓菌素测定用培养基(PDP)的应用

背景^[1-3]

绿脓菌素测定用培养基(PDP)用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验。

成分(g/L)：

蛋白胨20.0；氯化镁1.4；硫酸钾10.0；琼脂18.0；pH值7.4±0.1 25℃

用法：称取本品49.4g，另称取10g甘油，溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，备用。

绿脓菌素生成试验方法及原理：

方法：挑取可疑菌落接种在在绿脓菌素测定用培养基（PDP）斜面上，培养24小时，观察斜面有无色素。如有色素，在试管内加氯仿3.0～5.0mL，充分震摇，使培养物中的绿脓菌素提取在氯仿中，待氯仿提取液呈现绿色时，加1mol/L盐酸约1mL，震摇后静置片刻，上层盐酸溶液中呈现粉红至红色实验结果为阳性，否则为阴性。

原理：铜绿假单胞菌能产生的绿脓菌素能被氯仿提取，且在水中溶解度比氯仿大，并且会发生可逆的氧化还原反应，氧化时碱性呈蓝色，酸性呈红色。所以加入盐酸溶液并震摇后，绿脓菌素会由氯仿转移至盐酸溶液中，并在酸性环境中呈红色。

操作步骤：

1按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液

2取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上

3 36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。总大肠杆菌=蓝绿色菌落

4对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验

应用^[4][5]

用于绿脓菌素对食源细菌生长和成膜影响的初步研究

基于绿脓菌素的氧化还原特性,采用电化学扫描显微分析（SECM）中方波伏安法（SWV）和分光光度法研究了铜绿假单胞菌生长过程中绿脓菌素的产生及其在不同体系中对食源细菌生长和成膜的影响。

主要结果如下:1.建立了电化学方波伏安法（SWV）和分光光度法相结合测定铜绿假单胞菌生长及其生长过程中所产生PYO的方法。对于电化学SWV法,PYO在-0.33V有电流峰,该峰可作为定性和定量测定铜绿假单胞菌生长过程中PYO的特征峰;对于分光光度法,PYO在685 nm有吸收波长,该波长也可以用来定性和定量测定铜绿假单胞菌生长过程中PYO的变化,通过分光光度法研究了摇床培养（氧气充足）和静置培养（氧气缺乏）的条件下,细菌的生长状况以及相应PYO含量的变化。

结果表明,PYO在介导菌膜形成方面具有促进作用。2.采用分光光度法研究了不同浓度（0μmol/L、30μmol/L、50μmol/L、70μmol/L）PYO对3种食品加工环境中常见食源细菌（铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和大肠杆菌）的生长影响,结果表明,不同浓度PYO对铜绿假单胞菌生长具有一定的促进作用,对荧光假单胞菌以及大肠杆菌的生长均有不同程度的抑制作用,浓度越高抑制作用越强,其中70μmol/LPYO对大肠杆菌生长抑制作用最强。

同时研究了不同抗氧化试剂（NAC、SOD、AA）对PYO介导下大肠杆菌生长的影响,不同抗氧化剂均在不同程度对菌体细胞有保护作用,但是脂溶性的（NAC）能穿过细胞膜,其对细菌的保护效果要优于（SOD）和（AA）。结果表明,PYO对于食源细菌生长的抑制主要基于其氧化活性所产生的活性氧自由基。

参考文献

[1]Radical radiotherapy in high-risk prostate cancer patients with high or ultra-high initial PSA levels:a single institution analysis[J].Alessia Guarneri,Angela Botticella,Andrea Riccardo Filippi,Andrea Ruggieri,Cristina Piva,Fernando Munoz,Riccardo Ragona,Paolo Gontero,Umberto Ricardi.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2013(7)

[2]Visualization of Oxygen Consumption of Single Living Cells by Scanning Electrochemical Microscopy:The Influence of the Faradaic Tip Reaction[J].Michaela Nebel,Stefanie Grützke,Nizam Diab,Albert Schulte,Wolfgang Schuhmann.Angew.Chem.Int.Ed..2013(24)

[3]Pyocyanin effects on respiratory epithelium:relevance in Pseudomonas aeruginosa airway infections[J].Balázs Rada,Thomas L.Leto.Trends in Microbiology.2012

[4]Biofilm formation in food industries:A food safety concern[J].Sokunrotanak Srey,Iqbal Kabir Jahid,Sang-Do Ha.Food Control.2012

[5]唐云鹏.绿脓菌素对食源细菌生长和成膜影响的初步研究[D].中南林业科技大学,2017.