3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐的一种制备方法

背景技术

目前酶免疫分析(EIA)技术，已被广泛应用于抗原，半抗原或抗体的定量或定性检测分析。辣根过氧化物酶(HRP)及其偶联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶，由于3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB)在HRP的显色反应体系中，比其它色原具有更高的灵敏度且无致癌性而被广泛应用。TMB主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA)，免疫斑点杂交或者免疫组化以及氯和过氧化氢的检测分析。

3,3',5,5'-四甲基联苯胺及3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐或其中间体的合成报道，目前还比较少，主要有以下几种方法。

以4-溴-2,6-二甲基苯胺为原料，通过钯碳等进行偶联，得到3,3',5,5'-四甲基联苯胺。以2,6-二甲基苯胺为原料，通过氧化、还原、重排反应为得到3,3',5,5'-四甲基联苯胺及3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐。专利CN1056304用赤血盐氧化，用氯化铵锌粉体系还原，用盐酸重排合成；苏联专利RU2086536用双氧水做氧化剂，用氯化铵锌粉体系还原，用硫酸重排合成。CN107652187A此专利与上述类似，只是先生成中间产物2,2',6,6'-偶氮四甲基苯胺-N,N-二氧化物，然后用硫代硫酸钠和硫氢化钠还原为2,2',6,6'-四甲基二苯肼，再用酸重排得到3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐。

以上合成方法，有的用到钯碳等成本较高，有的步骤繁琐或收率太低，或仅限于小试研究，不适于工业化放大生产。

制备方法

步骤1：2,2',6,6'-四甲基偶氮苯的合成

在2000mL三颈玻璃瓶中，加入2,6-二甲基苯胺121克(1mol)，以及1000mL乙酸乙酯，搅拌，再加入高锰酸钾237克(1.5mol)，于室温下搅拌反应24小时，反应完毕，抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，合并滤液，浓缩得到2,2',6,6'-四甲基偶氮苯114克，收率95.8%，可直接进行下一步反应。

步骤2：3,3',5,5'-四甲基联苯胺的合成

在2000mL三颈玻璃瓶中，把2,2',6,6'-四甲基偶氮苯95.2克(0.4mol)溶于800mL乙酸乙酯中，溶液呈现深棕红色，加入6M盐酸200mL(1.2mol)和锌粉52克(0.8mol)，室温下搅拌进行反应，反应体系先由原来的棕色逐渐由深变浅，后变为无色澄清，然后又有白色固体产生，待反应完毕，加入氢氧化钠水溶液，调到中性至碱性，分层，有机层水洗，无水硫酸钠干燥，有机层浓缩后，正庚烷打浆得到白色晶状固体3,3',5,5'-四甲基联苯胺92克，熔点：169-170°C，收率96%。

步骤3：3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐的合成

在2000mL三颈玻璃瓶中，加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺120克(0.5mol)和1000mL乙酸乙酯，搅拌，使完全溶解为澄清透明溶液，缓慢加入30%浓盐酸，有固体生成，待加入30%盐酸120mL后，再搅拌30分钟，然后抽滤，得到白色固体，用水重结晶，得到白色晶状固体3,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐133克，收率85%。

参考文献

[1]南京艾普特生物医药有限公司. 一种3,3’,5,5’-四甲基联苯胺及其盐酸盐的合成方法:CN201810765630.6[P]. 2020-11-10.