豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)ELISA KIT应用固相夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）可检测豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)的含量。已知IFABP浓度的标准品，未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IFABP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A，B和酶结合物同时作用产生颜色。颜色的深浅和样品中IFABP的浓度呈正相关。

脂肪酸结合蛋白（fatty acid-binding protein，FABP）存在于多种组织中，所结合的蛋白是清蛋白，以心肌和骨骼肌中的含量最丰富。FABP是细胞内脂肪酸载体蛋白，其在细胞内利用脂肪酸中起重要作用。脂肪酸结合蛋白(FABPs)是一系列脂质伴侣蛋白，其蛋白中央空腔可以结合长链脂肪酸及其他一些疏水性配体。脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding protein,FABP)是胞内脂质结合蛋白超家族成员,存在于脊椎动物和无脊椎动物的细胞内,在长链脂肪酸的摄取、转运及代谢调节中发挥重要作用,并涉及生物体的其他生命过程。

ELISA（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

应用^[4][5]

用于肠脂肪酸结合蛋白对腹部闭合性损伤所致小肠破裂诊断价值的研究

脂肪酸结合蛋白（fatty acid binding protein,FABP）是一种低分子家族式蛋白,肠脂肪酸结合蛋白（intestinal fatty acid binding protein,IFABP）是其中成员之一,主要位于小肠粘膜微绒毛尖端,是一组存在于细胞液内的一种低分子量蛋白,其大量存在于小肠粘膜层上皮细胞中,占肠粘膜蛋白的2-3%,在肠粘膜对长链脂肪酸的摄取、转运及代谢调节中发挥重要作用。

正常情况下,外周静脉血中检测不到IFABP,发生小肠粘膜破裂损伤时,最早发生病理生理改变的是微绒毛尖端,维持绒毛尖端稳定的环境打破及氧分压下降,导致肠绒毛顶端细胞的坏死,肠上皮细胞通透性增加,其内的IFABP经过门静脉和乳糜管释放入血。

肠脂肪酸结合蛋白可能是小肠黏膜损伤的早期血清学标志物。IFABP在正常情况下的外周血中不存在,仅在发生小肠破裂时释放入血,并可被检测,这种变化为其成为小肠破裂的标记物提供了可能性。

研究结果发现IFABP作为诊断肠破裂具有独特优势:（1）IFABP具有较好器官特异性,仅存于肠道中。同时具有特异的抗原决定簇,可通过免疫学方法与其他组织产生的脂肪酸结合蛋白区分;

（2）IFABP是一组存在于细胞液内的一种低分子量蛋白,主要位于小肠黏膜层的肠上皮细胞胞液中,对肠破裂引发的损害敏感,在发生小肠破裂时易释放入血,血清IFABP水平病程早期即明显升高,敏感性好;

（3）IFABP占细胞胞液蛋白质的1%-2%,含量相对丰富,且IFABP分子量相对较小,实验室可采用酶联免疫法直接检测;

（4）多数血清酶都存在热不稳定性,是热不稳定酶,易失活,影响测定准确性,因此测定时需保持酶活性,血清IFABP即使室温下,也可保持24 h稳定,可保持总活性的95%,便于检测。动物实验结果表明,小肠损伤早期,血清和尿液中IFABP水平即明显增高。

参考文献

[1]On the pathophysiology of intestinal ischemic injury.Haglund U,Bulkley GG,Granger DN.AMSCTA Chir Scand.1987

[2]Structure,mRNA expression and linkage mapping of the brain-type fatty acid-binding protein gene（FABP7）from zebrafish（Danio rerio）.Liu Rong-Zong,Denovan-Wright Eileen M,Wright Jonathan M.European journal of biochemistry/FEBS.2003

[3]Unravelling the significance of cellular fatty acidbinding proteins.Glatz JF,Storch J.Current Opinion in Lipidology.2001

[4]Fatty Acid Transfer from Liver and Intestinal Fatty Acid-binding Proteins to Membranes Occurs by Different Mechanisms.Kuo-Tung Hsu,Judith Stor.Journal of Biological Chemistry.1996

[5]邢竞晓.肠脂肪酸结合蛋白对腹部闭合性损伤所致小肠破裂诊断价值的研究[D].石河子大学,2016.