大鼠N端前脑钠素(NT-PROBNP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

大鼠N端前脑钠素(NT-PROBNP)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)水平。用纯化的大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入N端前脑钠素(NT-proBNP)，再与HRP标记的N端前脑钠素(NT-proBNP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的N端前脑钠素(NT-proBNP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)浓度。

操作步骤：

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

应用^[4][5]

用于脑钠素及N端脑钠素前体在心力衰竭诊断中的价值研究

脑钠肽(BNP)是一种主要由心室肌细胞分泌的肽类激素,具有利尿、利钠、扩张血管以及松弛平滑肌的作用,同时还具有对抗心室重塑,减少心肌肥厚和心室扩大等作用,在体液平衡的调节中发挥关键作用。

N末端脑钠素前体(NT-proBNP)是心室肌细胞分泌BNP时生成的无活性的肽段,因此与BNP一样具有相同的生物学特性。BNP与NT-proBNP血浆浓度的检测在许多疾病尤其在心血管疾病的诊疗活动中具有重要的应用价值,血浆BNP与NT-proBNP水平是心肺疾病鉴别诊断、心血管疾病诊断、疗效评估及预后等方面的重要指标。

对脑钠素及N末端脑钠素前体在充血性心力衰竭中的作用进行研究。方法:设心衰组108例及对照组50例,利用荧光免疫法测定血浆脑钠素、酶联免疫法测定血浆N末端脑钠素前体,同时进行左室射血分数(LVEF)及根据纽约心功能分级(NYHA)进行心功能分级,分析血浆BNP与NT-proBNP浓度与心功能级别、左室射血分数的关系,并进行统计学处理比较分析。

参考文献

[1]B-type Natriuretic Peptide Rapid Assay:A Diagnostic Test for Heart Failure[J].Irma B.Ancheta.Dimensions of Critical Care Nursing.2006(4)

[2]B-Type Natriuretic Peptide Levels in Congenital Heart Disease[J].C.G.Cowley,J.D.Bradley,R.E.Shaddy.Pediatric Cardiology.2004(4)

[3]B-type natriuretic peptide in cardiovascular disease[J].James A de Lemos,Darren K McGuire,Mark H Drazner.The Lancet.2003(9380)

[4]Use of Plasma Brain Natriuretic Peptide Concentration to Aid in the Diagnosis of Heart Failure[J].Brian P.Shapiro,Horng H.Chen,John C.Burnett,Margaret M.Redfield.Mayo Clinic Proceedings.2003(4)

[5]王卓.脑钠素及N端脑钠素前体在心力衰竭诊断中的价值[D].大连医科大学,2009.