小鼠总三碘甲腺原氨酸(TT3)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠总三碘甲腺原氨酸(TT3)ELISA试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中总三碘甲腺原氨酸（TT3）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠总三碘甲腺原氨酸（TT3）水平。用纯化的小鼠总三碘甲腺原氨酸（TT3）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总三碘甲腺原氨酸（TT3），再与HRP标记的总三碘甲腺原氨酸（TT3）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的总三碘甲腺原氨酸（TT3）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠总三碘甲腺原氨酸（TT3）浓度。

操作流程

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

血清总三碘甲腺原氨酸是判断甲亢或甲减的常用指标，是诊断T3性甲亢的特异性指标，同时对病情严重程度评估、疗效监测有应用价值。

应用^[4][5]

用于异基因骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性甲状腺炎的治疗效果及对Th1/Th2细胞平衡影响的研究

异基因骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)小鼠的治疗作用,并通过测定血清干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-10(interleukine-10,IL-10)的表达水平继而从Thl/Th2细胞因子失衡角度初步探讨其免疫调节作用机制。

方法：无菌条件下分离Wistar大鼠股骨骨髓,采用全骨髓贴壁筛选法培养并纯化其骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),经流式细胞仪检测其是否表达免疫表型CD29、CD44及CD34、CD45。选取36只雌性C57BL/6小鼠,随机分成A、B、C三组,每组12只,A组为正常对照组,B组为EAT模型组,C组为干预治疗组。B、C两组在第0天和14天分别给予猪甲状腺球蛋白(Porcine Thyrogiobulin,PTg)免疫诱发EAT动物模型,A组在相同时间给予相同剂量的生理盐水作为对照；C组于0、7、14、21天通过尾静脉注射异基因骨髓间充质干细胞(BMSCs)3×105/150ul干预性治疗,A、B两组小鼠在相同时间注射相同剂量的生理盐水作为对照。

所有小鼠均在初次免疫28天后处死,分离血清,检测甲状腺球蛋白自身抗体(thyroglobulin antibody,TgAb)、甲状腺过氧化物酶自身抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺微粒体抗体(thyroid microsomal antibody,TmAb)、总甲状腺素(total thyroxine,TT4)、总三碘甲腺原氨酸(total triidothyromine,TT3)、IFN-γ、IL-10表达水平；同时分离甲状腺进行病理分析。

参考文献

[1]Mesenchymal stem cells as an immunomodulatory therapeutic strategy for autoimmune diseases[J].Eyal Ben-Ami,Sonia Berrih-Aknin,Ariel Miller.Autoimmunity Reviews.2011(7)

[2]Bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in patients with multiple sclerosis:A pilot study[J].Bassem Yamout,Roula Hourani,Haytham Salti,Wissam Barada,Taghrid El-Hajj,Aghiad Al-Kutoubi,Aline Herlopian,Elizabeth Kfoury Baz,Rami Mahfouz,Rima Khalil-Hamdan,Nabeela M.A.Kreidieh,Marwan El-Sabban,Ali Bazarbachi.Journal of Neuroimmunology.2010(1)

[3]Development of Dendritic Cell-Based Immunotherapy for Autoimmunity[J].Catharien M.U.Hilkens,John D.Isaacs,Angus W.Thomson.International Reviews of Immunology.2010(2)

[4]Mesenchymal stem cells are functionally abnormal in patients with immune thrombocytopenic purpura[J].Jose Antonio Pé,rez-Simó,n,Soraya Tabera,Marí,a Eugenia Sarasquete,Marí,a Dí,ez-Campelo,Javier Canchado,Luis Ignacio Sá,nchez-Abarca,Belé,n Blanco,Ignacio Alberca,Carmen Herrero-Sá,nchez,Consuelo Cañ,izo,Jesú,s F.San Miguel.Cytotherapy.2009(6)

[5]丁玉达.异基因骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性甲状腺炎的治疗效果及对Th1/Th2细胞平衡影响的研究[D].天津医科大学,2012.