Anti-NeuN (rabbit polyclonal)的应用

背景^[1-3]

Anti-NeuN(rabbit polyclonal)是以Anti-NeuN为抗原的多克隆抗体，可以特异性结合Anti-NeuN。Anti-NeuN(rabbit polyclonal)主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等Anti-NeuN检测实验。

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。

抗神经元核抗体分为1型和2型，1型又称为Hu抗体，2型又称为Ri抗体。Hu的靶抗原存在于中枢及外周神经系统的所有神经元，也存在于相关肿瘤细胞内。Ri的靶抗原局限于中枢神经系统的神经元。

未发现正常人存在抗神经元核抗体。Hu抗体比Ri抗体常见。临床上常用间接免疫荧光法测定抗神经元核抗体。间接免疫荧光法实验原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。

步，用未知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。

第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果步发生了抗原抗体反应，标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定未知抗体。

应用^[4][5]

用于ERK-TRPV4通路在大鼠背根神经节持续受压致痛觉敏感中的作用机制研究

取实验大鼠随机分为5组,分别给予生理盐水、shRNA 10^4病毒单位(toxic units,TU)、10^5 TU、10^6 TU和10^7 TU,每组各位6只大鼠。各组中,每只大鼠鞘内注射体积均为10uL,连续注射3天。自第1天注射开始计算,第5天时,生理盐水心脏灌注后取材。随后利用Western Blot及RT-qPCR的方法,进行检测并评价慢病毒鞘内注射的效果从而确定慢病毒的注射滴度。

蛋白印记法测定CCD后DRG及脊髓背角组织中的蛋白表达手术侧L4及L5背根神经节以及相应节段的脊髓背角,提取总蛋白。SDS-PAGE凝胶电泳法使蛋白分离,转印蛋白至PVDF膜,室温封闭、一抗及二抗孵育后显影。检测鞘内注射慢病毒干扰ERK后,DRG及脊髓背角组织中TRPV4、ERK及P-ERK蛋白表达变化。

实时定量荧光PCR测定DRG及脊髓背角组织中mRNA的表达变化手术侧L4及L5背根神经节及相应节段的脊髓背角,快速取材,提取总RNA,测定浓度。利用Real-time quantitative PCR检测DRG及脊髓背角组织中TRPV4、ERK1及ERK2的mRNA表达变化。各指标的引物序列同部分。

免疫共沉淀使用IP-WB裂解液,提取DRG和脊髓背角的组织总蛋白后,采用Prorein A-argarose方法,分别用anti-TRPV4抗体和anti-ERK抗体与之反应,进行免疫共沉淀结合。沉淀后的复合物利用蛋白印记法进行分析,分别观察各组中是否存在所需目的蛋白。

脊髓和DRG的免疫组织化学染色一抗为:anti-NeuN多克隆抗体(小鼠抗大鼠,1:300,Abcam,USA);anti-ERK多克隆抗体(兔抗大鼠,1:500,CST,USA);anti-P-ERK多克隆抗体(兔抗大鼠,1:200,CST,USA);anti-TRPV4多克隆抗体(兔抗大鼠,1:200,Abcam,USA)。二抗为:辣根过氧化物酶标记-山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记-山羊抗兔IgG(北京义翘神州科技有限公司)。经DAB显染色和苏木素染核后,观察目的蛋白的组织定位。

参考文献

[1]TRPV1-dependent ERK1/2 activation in porcine lens epithelium[J].Amritlal Mandal,Mohammad Shahidullah,Nicholas A.Delamere.Experimental Eye Research.2018

[2]MAPK Pathways Are Involved in Neuropathic Pain in Rats with Chronic Compression of the Dorsal Root Ganglion[J].Yu-Juan Qu,Lei Jia,Xiao Zhang,Hui Wei,Shou-Wei Yue,Haroon Khan.Evidence-Based Complementary and Alternative Medi.2016

[3]Effect of TRPV4-p38 MAPK Pathway on Neuropathic Pain in Rats with Chronic Compression of the Dorsal Root Ganglion[J].Yu-Juan Qu,Xiao Zhang,Zhen-Zhen Fan,Juan Huai,Yong-Bo Teng,Yang Zhang,Shou-Wei Yue,Akio Hiura.BioMed Research International.2016

[4]Ca 2+influx mediates the TRPV4–NO pathway in neuropathic hyperalgesia following chronic compression of the dorsal root ganglion[J].Jie Wang,Xiao-Wei Wang,Yang Zhang,Cui-Ping Yin,Shou-Wei Yue.Neuroscience Letters.2015

[5]贾磊.ERK-TRPV4通路在大鼠背根神经节持续受压致痛觉敏感中的作用机制研究[D].山东大学,2019.