人抗丙型肝炎病毒抗体(ANTI-HCV)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人抗丙型肝炎病毒抗体(ANTI-HCV)ELISA KIT是用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要经输血、针刺、吸毒等传播，据世界卫生组织统计，全球HCV的感染率约为3%，估计约1.8亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。丙型肝炎呈全球性流行，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌（HCC）。未来20年内与HCV感染相关的死亡率（肝衰竭及肝细胞癌导致的死亡）将继续增加，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。HCV病毒体呈球形，直径小于80nm（在肝细胞中为36～40nm，在血液中为36-62nm），为单股正链RNA病毒，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。HCV仅有Huh7,Huh7.5,Huh7.5.1三种体外细胞培养系统，黑猩猩可感染HCV，但症状较轻。

应用^[4][5]

人抗丙型肝炎病毒抗体(ANTI-HCV)ELISA KIT用于多表位融合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti-HCV可行性研究。

anti-HCV检测对于控制HCV经输血传播，及时诊断HCV感染患者发挥了巨大的作用。目前所用第三代ELISA检测试剂较早期试剂在灵敏度和特异性上都有了很大提高，但在检测低感染率(＜10％)人群时特异性仍不理想，阳性结果人群中约35％(15％－60％)为假阳性，在献血员中阳性结果的预示值仅为70－80％，造成了医疗资源和宝贵血源的很大浪费。双抗原夹心法在方法学上比目前所用间接法特异性更好，灵敏度更高，本研究旨在建立双抗原夹心anti－HCV ELISA检测方法，以解决间接法特异性不足问题。多表位触合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti一HCV可行性研究3.Anti一HCv双抗原夹心EL工SA法的建立及效果评价用His一tagged一HCV抗原包被酶联板，以可溶性表达的biotin一tagged一HCV作为夹心抗原，Str即tav 1 d in一HRP用作显色用酶标记物建立了双抗原夹心法。结果显示，方法具有极好的特异性，400份阴性血清无一例假阳性;接法检测阳性的标本中，有12份标本双抗原夹心法检测阴性，这RT一PCR及RIBA确证试验均为阴性。结论:目前anti一HCV的检测国内外均只有间接ELISA法，本文选取临床350应用份间12份标本经优势表位和不同型别抗原表位，抗原去除了与检测无关的序列，构建了多表位融合重组HCv抗原。HCV各抗原的优势表位融合避免了非特异反应的发生;同时由于兼顾了不同HCV型别差异，也会使检出率有所提高。带有生物素标签的融合抗原克服了分片段抗原联合应用时难以掌握配比及酶标记对抗原活性影响等难题，使双抗原夹心检测anti一HCV得以实现。

参考文献

[1]Genetic complexity and serum reactivity of HVR1 quasispecies of hepatitis C virus in patients with cirrhosis.Fan X,Di Bisceglie AM.The American journal of Gastroenterology.2002

[2]Genetic complexity and serum reactivity of HVR1 quasispecies of hepatitis C virus in patients with cirrhosis.Fan X,Di Bisceglie AM.The American journal of Gastroenterology.2002

[3]Hepatitis C virus nonstructural 3 protein:recombinant NS3 protein of the Thai isolates as an antigen in a diagnostic assay.Kanistanon D,Wongprompitak P,Dharakul T,et al.Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology.2002

[4]Expression of hepatitis C virus hypervariable region 1 and its clinical significance.Zhang XX,Zhang SY,Liu J,et al.World Journal of Gastroenterology.2003

[5]李保昌.多表位融合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti-HCV可行性研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,2004.