DNA拓普西异构酶Ⅱ抗体的应用

背景^[1-3]

DNA拓普西异构酶Ⅱ抗体是可以特异性结合DNA拓普西异构酶Ⅱ的一类多克隆抗体，主要用于检测DNA拓普西异构酶Ⅱ的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中，要暂时的将DNA的一个链或两个链切断，根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶（top-oisomeraseⅠ），通过切断二个链来进行的称为Ⅱ型拓扑异构酶（topoisomeraseⅡ）。

拓扑异构酶II是一种能催化DNA拓扑异构体相互变换，调节DNA三维结构的核酶。与染色质或染色体的组装与分组装、基因组复制、DNA重组、基因转录及DNA损伤后修复等有密切的关系。

DNA拓扑异构酶在DNA解链时在将要打结或已打结处作切口。下游的DNA穿越切口并作一定程度的旋转，把结打开或解松，然后旋转复位连结。这样解链就不因打结的阻绊而继续下去。即使出现打结现象，双链的局部打开，也会导致DNA超螺旋的其他部分过度拧转，形成正超螺旋。拓扑酶通过切断、旋转和再连接的作用，实现DNA超螺旋的转型，即把正超螺旋变成负超螺旋。

许多人的恶性肿瘤都有拓扑异构酶II的过表达，因此，拓扑异构酶II是许多化疗药的靶标。大部分以拓扑异构酶II为重要靶标抗肿瘤的化疗药物是通过稳定的DNA与拓扑异构酶II的复合物激发凋亡的。

应用^[4][5]

用于Riccardin D靶向DNA拓扑异构酶Ⅱ的抗肿瘤作用研究

RiccardinD是从苔藓类植物Dumortiera hirsuta分离所得的一种新型的大环双联卞类化合物。前期研究表明,RiccardinD可以抑制真菌被膜的形成,它的类似物羽苔素E可以逆转真菌耐药和肿瘤耐药,另一类似物地钱素C可以通过诱导微管解聚进而导致细胞凋亡最终发挥抗肿瘤作用,还可将肿瘤细胞阻滞在G2/M期抑制其增殖。

方法1.RiccardinD对白血病细胞凋亡作用研究选用人慢性骨髓性白血病细胞株K562及人急性粒细胞白血病细胞株HL60,MTT法检测不同浓度riccardinD对白血病细胞增殖的抑制作用,Hoechst33258,FITC-Annexin V双染法及DNA Ladder检测riccardinD对白血病细胞凋亡的影响Western blotting检测riccardinD对凋亡蛋白Caspase-3,Caspase-9,cleaved PARP9表达的影响。RT-PCR检测riccardinD对细胞凋亡抑制因子Bcl-2与细胞凋亡促进因子Bax-a比值的影响。最后检测线粒体和死亡受体介导的两条凋亡通路中的关键分子Cytochrome c及Caspase-8分析riccardinD可能介导的凋亡通路。

2. RiccardinD对拓扑异构酶Ⅱ活性的影响以pBR322 DNA为作用底物,etoposide为阳性对照,检测riccardinD对拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶Ⅱ活性的影响。将riccardinD作用于K562细胞后,提取其拓扑异构酶Ⅱ,检测riccardinD对细胞内拓扑异构酶Ⅱ活性的影响。实时定量RT-PCR检测riccardin D对DNA拓扑异构酶Ⅱα基因表达的影响。SPR分析进一步检测riccardinD与拓扑异构酶Ⅱα间的结合能力。选用拓扑异构酶Ⅱα缺陷型细胞株HL60/MX2及构建拓扑异构酶Ⅱα高表达细胞系K562/TopoIIa检测riccardinD对两种细胞增殖的影响。

3.RiccardinD对非小细胞肺癌生长的影响体外法,选取非小细胞肺癌细胞H460及A549,采用MTT,Hoechst33258及FITC-Annexin V双染法检测riccardinD对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响。另外,划痕试验、重组基底膜侵袭与转移及明胶酶活性测定试验检测riccardinD对非小细胞肺癌细胞侵袭及转移能力的影响。

参考文献

[1]Analysis of proteome changes in doxorubicin-treated adult rat cardiomyocyte[J].Suresh N.Kumar,Eugene A.Konorev,Deepika Aggarwal,Balaraman Kalyanaraman.Journal of Proteomics.2011(5)

[2]The protective role of arjunolic acid against doxorubicin induced intracellular ROS dependent JNK-p38 and p53-mediated cardiac apoptosis[J].Jyotirmoy Ghosh,Joydeep Das,Prasenjit Manna,Parames C.Sil.Biomaterials.2011(21)

[3]Tea and cancer prevention:Epidemiological studies[J].Jian-Min Yuan,Canlan Sun,Lesley M.Butler.Pharmacological Research.2011(2)

[4]FANCD2 but not FANCA promotes cellular resistance to type II topoisomerase poisons[J].Lisa A.Kachnic,Li Li,Loreen Fournier,Natalie Ferraiolo,Jochen Dahm-Daphi,Kerstin Borgmann,Henning Willers.Cancer Letters.2011(1)

[5]薛霞.Riccardin D靶向DNA拓扑异构酶Ⅱ的抗肿瘤作用研究[D].山东大学,2011.