人抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA KIT用纯化的人抗肌动蛋白抗体(AAA）抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗人抗肌动蛋白抗体(AAA）抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。肌动蛋白抗体(AAA)属抗平滑肌抗体。

靶抗原为细胞骨架肌动蛋白的一个亚类，可见于自身免疫性肝炎和原发性胆汁性肝硬化。肌动蛋白是百细胞的一种重要骨架蛋白，是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。肌动蛋白具有收缩功能，分布广泛度，在细胞分泌、吞噬、移动、细胞质环流和细胞质分裂等生命活动中起重要作用。β-肌动蛋白（β-Actin）由375aa组成，回分子量约42Kd，其抗体主要用于标记平滑肌及其来源的肿瘤。β-Actin蛋白在细胞的表达水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常答被用于免疫染色以观察细胞的微丝结构。

应用^[4][5]

人抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA KIT用于自身免疫性肝炎与F-肌动蛋白及其受体和抗体水平相关性研究。

自身免疫性肝炎(AIH)是由于肝脏自身免疫功能紊乱导致的炎症性损伤性疾病。大量研究表明,体内凋亡细胞负荷过重和对凋亡细胞的清除缺陷参与了以AIH为代表的自身免疫性疾病的发生发展。F-肌动蛋白(F-actin)是凋亡细胞继发性坏死或原发性坏死时释出的一种DAMPs(损伤相关分子模式),可与树突状细胞表面受体CLEC9A(C型凝集素9家族A成员)特异性结合,启动自身免疫应答反应。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测分析AIH患者血清中F-肌动蛋白抗体水平与F-肌动蛋白及CLEC9A的相关性;利用受试者工作特征曲线(ROC)分析F-肌动蛋白、CLEC9A及F-肌动蛋白抗体对AIH的诊断价值。结果:1.AIH病例组、疾病对照组和健康对照组血清中F-肌动蛋白浓度平均水平分别为(1.64±1.94)ng/ml、(0.79±0.60)ng/ml和(0.68±0.70)ng/ml,AIH病例组与疾病对照组、健康对照组差异均有统计学意义(t=2.450,P=0.0165;t=2.959,P=0.0040);F-肌动蛋白浓度与AIH患者年龄、体重和转氨酶水平均呈正相关(P<0.05);ROC曲线中,曲线下面积(AUC)为0.81[95%CI(0.74,0.89)],差异有统计学意义(P<0.0001)。F-肌动蛋白浓度的临界值(cut-off值)为0.7535 ng/ml时,约登指数(YI=0.47),对AIH的诊断敏感度为0.65,特异度为0.82。

参考文献

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[2]Solid phase assays versus automated indirect immunofluorescence for detection of antinuclear antibodies[J].Jolien Claessens,Thibaut Belmondo,Ellen De Langhe,Rene Westhovens,Koen Poesen,Sophie Hüe,Daniel Blockmans,Michael Mahler,Marvin J.Fritzler,Xavier Bossuyt.Autoimmunity Reviews.2018(6)

[3]Diagnostic value of screening enzyme immunoassays compared to indirect immunofluorescence for anti-nuclear antibodies in patients with systemic rheumatic diseases:A systematic review and meta-analysis[J].Seri Jeong,Dahae Yang,Woonhyoung Lee,Geun-Tae Kim,Hyon-Suk Kim,Hyeong Sik Ahn,Hyun Jung Kim.Seminars in Arthritis and Rheumatism.2018

[4]Cellular and Molecular Mechanisms of Autoimmune Hepatitis[J].G.J.Webb,G.M.Hirschfield,E.L.Krawitt,M.E.Gershwin.Annual Review of Pathology:Mechanisms of Disease.2018

[5]吴兆立.自身免疫性肝炎与F-肌动蛋白及其受体和抗体水平相关性研究[D].湖北中医药大学,2019.