人胸腺素Β4(TΒ4)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人胸腺素Β4(TΒ4)ELISA试剂盒用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

胸腺β4是胸腺肽β家族中的一员，胸腺β4由43个氨基酸组成，具亲水性。Tβ4是人体内主要的肌动蛋白调节分子之一，具有多重生物学功能，在组织再生、重塑、创伤愈合、维持肌动蛋白平衡、肿瘤发病与转移、细胞凋亡、炎症、血管生成、毛囊发育等生理、病理过程中扮演着极为重要的角色。

肌动蛋白调节因子肌动蛋白在非肌肉细胞中约占总蛋白的10%，是细胞结构、细胞运动和创伤愈合所需的重要组分。细胞中的Tβ4足以封闭所有的肌动蛋白，可参与调节肌动蛋白的聚合与解聚。最新的研究表明醋酸胸腺β4基因的表达水平与癌细胞转移呈正相关，与肿瘤凋亡关系密切。这为寻找治疗癌症的新方法提供了新的思路，因此具有广阔的新药开发前景。

应用^[4][5]

用于重组人胸腺素β4的表达纯化及生物学活性检测

胸腺素β4是真核细胞中一种重要的肌动蛋白螯合分子,广泛分布于人体内大部分组织和细胞中,具有多方面生物学活性,并参与细胞迁移、血管形成、炎症反应等多种病理生理过程。目前已有较多研究表明,胸腺素β4在组织损伤修复,尤其是皮肤创伤愈合过程中起到重要作用。利用基因重组技术在原核表达系统中克隆表达人胸腺素β4蛋白,检测纯化蛋白产物的生物学活性和在小鼠皮肤创伤愈合模型中的作用,为建立一种简便易行的在体外制备具有生物学活性的胸腺素β4蛋白的工艺方法,及研究其在皮肤创伤愈合中的作用机制奠定基础。

方法：采用基因重组方法将胸腺素β4基因克隆至原核表达载体pTXB1,诱导其融合蛋白Tβ4-intein-CBD在大肠杆菌中的表达；Chitin亲和纯化表达产物,采用HPLC、N端测序及Western blot等分析手段对纯化蛋白进行鉴定；在3T3小鼠胚胎成纤维细胞中应用MTT法检测蛋白产物的生物学活性,并通过建立小鼠皮肤创伤模型,制作切片进行组织形态学观察,来研究重组人胸腺素β4在皮肤组织损伤修复中的作用。

结果：通过基因重组方法成功构建了原核表达载体pTXB1-Tβ4,能够在IPTG诱导下在大肠杆菌BL21(DE3)中有效表达融合蛋白Tβ4-intein-CBD;表达的融合蛋白经Chitin亲和纯化和分子筛精制后能够得到纯度较高的重组人胸腺素β4蛋白产物,且经鉴定理化性质不变。

参考文献

[1]Serum levels of immunoreactive thymosin alpha 1 and thymosin beta 4 in large cohorts of healthy adults.Weller F E,Shah U,Cummings G D,Chretien P B,Mutchnick M G.Thymus Cancer.1992

[2]Distribution of thymosin beta 4 in vertebrate classes.Erickson-Viitanen S,Ruggieri S,Natalini P,Horecker B L.Archives of Biochemistry.1983

[3]Thymosin alpha 1:isolation and sequence analysis of an immunologically active thymic polypeptide.Goldstein A L,Low T L,McAdoo M,et al.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.1977

[4]Purification and biological activity of thymosin,a hormone of the thymus gland.Goldstein A L,Guha A,Zatz M M,Hardy M A,White A.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.1972

[5]赵双.重组人胸腺素β4的表达纯化及生物学活性检测[D].兰州大学,2012.