网织红细胞染色液的应用
发布日期:2020/5/9 11:04:09
背景[1][2]
网织红细胞染色液由灿烂甲酚蓝、梮橼酸钠、氯化钠、聚乙烯吡咯烷酮、纯化水组成。主要用于网织红细胞的染色，以便于镜下对网织红细胞计数。
骨髓中红细胞系统的增生发育过程是：多能干细胞→单能干细胞→原始红细胞→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞。从原始红细胞增殖到晚幼红细胞阶段共分裂3－4次，约需72小时，红细胞数由一个变为8一16个，细胞核由大变小而浓缩，胞浆中含血红蛋白逐渐增多。
晚幼红细胞以后细胞即不再分裂，发育过程中核被排出而成为网织红细胞。网织红细胞含有少量核糖核酸RNA)，用煌焦油蓝染色时成网状故名网织红细胞。网织红细胞进一步成熟，RNA消失而为成熟红细胞。从晚幼红细胞发育到成熟红细胞约需48小时，成熟红细胞的寿命约为120天。
网织红细胞是晚幼红细胞到完全成熟的红细胞之间的过度型细胞，由于其细胞浆中尚存在嗜碱性的RNA物质，用网织红细胞染色液进行活体染色后，胞浆中镜检可见有浅蓝色或深蓝色的网状结构。
网织红细胞染色液有新亚甲蓝或煌焦油蓝等组成，呈中性，用于网织红细胞活体染色，利用本染色液所染出的结果，背景颜色明亮清晰，而且不受长时间染色的影响。该染色液仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。
应用[3]
用于红细胞胞质因子对K～（562）细胞分化及其核基质—中间纤维体系影响的研究
以兔网织红细胞与人红白血病细胞融合后筛选出的胞质杂交体K—RRneo细胞为研究对象，系统地研究了细胞杂交前后的生长、分化特性及其核基质—中间纤维体系的变化规律。
采用Lipofectin转基因的方法，首次以无核的哺乳类细胞（兔网织红细胞）作为外源基因导入的靶细胞进行实验，结果表明：网织红细胞虽然没有核，但由于它具有可供外源基因表达的完备元件，可使导入的报告基因Lac Z在胞质中表达。
利用转入可供选择的外源基因，获得了携有pSV2neo基因的兔网织红细胞，并使之与人红白血病细胞K562相融合，筛选出具有G418抗性的胞质杂交体K—RRneo细胞。
该实验模型较经典的诱导突变、抗性筛选、细胞融合等方法的效率明显提高，且可避免由于网织红细胞缺乏核基因组、HGPRTmRNA半衰期有限，而不能长期保持HGPRT表型的弱点，以导入基因为遗传标志，使实验模型在研究基因表达调控、肿瘤细胞恶性逆转等有关分化问题时具有实用价值。
利用建立的胞质杂交体K—RRneo细胞为研究对象，并以其亲代的K562细胞为对照，系统地研究了细胞杂交前后的生长及分化特性改变。结果显示：K—RRneo细胞的生长较亲代K562细胞明显缓慢，细胞增殖率降低、分裂指数下降、DNA合成速率减慢。
利用c—myc癌基因探针的分子杂交技术检测，结果可见K—RRneo细胞的c—myc基因表达明显降低，只能检测到极其微弱的c—myc mRNA。
应用联苯胺蓝染色、Northern blot、RT—PCR及DNA测序等技术，分别对细胞杂交前后珠蛋白在翻译及转录水平上的表达进行了探测。
结果显示：亲代K562细胞内原已关闭的β—珠蛋白基因，在杂交细胞K—RRneo内被激活，K—RRneo细胞可检测到珠蛋白基因转录产物。
上述结果以新的实验模型，又一次证实了红细胞胞质因子的存在及其对K562细胞的恶性调控作用，为探索胞质因子对细胞分化及肿瘤细胞逆分化的调控作用提供了新的理论依据。
参考文献
[1]Cell-contact and-architecture of malignant cells and their relationship to metastasis[J] . Avraham Raz,Avri Ben-Ze’ev. CANCER AND METASTASIS REVIEW . 1987 (1)
[2]哺乳类(兔)红细胞分化因子的纯化及特性分析[J]. 费仁仁,孙诠,戴巾,朱斌,马跃,王鑫,周雪峰,王瑞瑜,薛社普. 生物化学杂志. 1992(01)
[3]马文丽. 红细胞胞质因子对K～（562）细胞分化及其核基质—中间纤维体系影响的研究[D].中国协和医科大学,1993.
欢迎您浏览更多关于网织红细胞染色液的相关新闻资讯信息