人血纤蛋白(FIBRIN)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人血纤蛋白(FIBRIN)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血纤蛋白(Fibrin)水平。用纯化的人血纤蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒ELISA试剂盒抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血纤蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒ELISA试剂盒，再与HRP标记的血纤蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒ELISA试剂盒抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血纤蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血纤蛋白(Fibrin)ELISA试剂盒ELISA试剂盒浓度。

血纤蛋白原是人类发现最早的一种凝血因子，呈伸长的椭球体，是由三对多肽链（一对α链、一对β链、一对γ链）以二硫键连接而成的二聚物，其分子量约为34万道尔顿。血纤蛋白原在肝脏中合成后进入血浆，以溶解形式存在。每100mL人血浆中含量约0.3g。血纤蛋白是一种高度不溶的蛋白质多聚体，是象细针一样的晶状物。是纤维蛋白原在生理条件下凝固而成的一种材料。血纤蛋白主要来源于血浆蛋白，因此具有明显的血液和组织相容性，无毒副作用和其他不良影响。作为止血剂、创伤愈合剂和可降解生物材料在临床上已经应用很久；它的主要生理功能为止血，另外还可明显促进创伤的愈合；还可作为一种骨架，促进细胞的生长；并具有一定的杀菌作用。

应用^[4][5]

用于分泌性表达人rPA毕赤酵母菌株的构建及发酵条件的优化研究

血栓病是人类面临的一类主要疾病,包括急性心肌梗塞、脑血栓、肺静脉血栓、动脉血栓和缺血性休克等。其中急性心肌梗塞(AMI)的死亡率高达30%。溶纤治疗被认为是治疗血栓病最为有效的方法。寻找、研制效果好、副作用小的治疗药物一直是世界范围的热门课题。其中占中心地位的是纤溶酶原激活剂(plasminogen activator简称PA),PA作为溶血栓药物的机理在于它能激活血纤溶酶原(plasminogen简称Pg)成为血纤溶酶(plasmin),后者能够降解构成血栓骨架的血纤蛋白(fibrin),从而消除血栓。

所谓溶纤能力包括了药物溶解血栓的速率、彻底性和再栓塞发生率等方面。一个好的溶纤剂能够溶解陈旧或新鲜的血栓,再栓塞率低。国内、外进入临床应用和正在研制的溶纤药物基本分为三代:代溶栓剂包括链激酶(SK)和尿激酶(UK),它们虽然具有较好的溶栓效果,但缺少纤维蛋白的选择性,除了能激活血栓表面的纤溶酶原外也能激活血浆中游离的纤溶酶原。使α2-抗纤溶酶大量消耗及纤维蛋白原降解,引起全身出血性副作用。第二代溶栓剂包括组织纤溶酶原激活剂(t-PA),尿激酶原(Pro-UK)等。t-PA和Pro-UK在体外和动物实验中都有明显的纤维蛋白亲和性,出血性副作用较小,体外无溶栓活性,进入血液后,与纤维蛋白结合后发生脱酰基水解反应,形成有活性的SK-纤溶酶原复合物,激活纤溶酶原。但存在体内半衰期短,给药时间长,再栓率高等缺点。第三代溶栓药物包括TNK-PA,STAR,rPA等以及正在研制的一些新型溶栓剂。它们基本具备以下特点:溶栓能力强,出血性副作用低,在血液中的半衰期长,总使用剂量少,治疗费用低等。

参考文献

[1]Biosynthetic production of type II fish antifreeze protein:fermentation by Pichia pastoris[J].M.C.Loewen,X.Liu,P.L.Davies,A.J.Daugulis.Applied Microbiology and Biotechnology.1997(4)

[2]Production of synthetic spider dragline silk protein in Pichia pastoris[J].S.R.Fahnestock,L.A.Bedzyk.Applied Microbiology and Biotechnology.1997(1)

[3]Active site labeling with dansyl-glutamyl-glycyl-arginyl chloromethyl ketone demonstrates the full activity of the refolded and purified tissue-type plasminogen activator variant BM 06.022[J].Ulrich Kohnert,Manfred Wozny,Manuel Llinas,Anita Roos,Stephan Fischer.Applied Biochemistry and Biotechnology.1995(2)

[4]邓长江.分泌性表达人rPA毕赤酵母菌株的构建及发酵条件的优化[D].山东大学,2005.