卵磷脂吐温胰蛋白胨大豆培养基的作用和应用研究

背景^[1-3]

卵磷脂吐温胰蛋白胨大豆培养基主要用于物体表面大多数细菌的培养和计数，不具有微生物鉴别和药敏鉴别的作用。

卵磷脂吐温胰蛋白胨大豆培养基中胨提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供能源；磷酸二氢钾为缓冲剂；琼脂是培养基的凝固剂。提供了较丰富的营养物质基础，适合多数微生物的生长。

卵磷脂吐温胰蛋白胨大豆培养基主要用于洁净环境沉降菌检测，以及与浮游菌采样器配套使用，用于洁净环境浮游菌检测。无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

应用^[4][5]

用于鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及二价灭活疫苗的研制

鸭传染性浆膜炎病是由鸭疫里默氏杆菌引起的接触性传染病。该病以2-8周龄鸭最易感,呈急性或慢性败血症。患病鸭常出现眼、鼻分泌物增多、拉稀、共济失调、头颈震颤等症状。剖检以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎部分病例出现干酪性输卵管炎、结膜炎、关节炎,死亡率10%～80%,耐过鸭生长迟缓、饲料报酬显著下降。由于该病可通过污染的饲料、饮水、飞沫、尘土等经呼吸道、消化道和皮肤损伤等途径传播,在发病鸭场持续存在,难以扑灭,因此被认为是造成养鸭业经济损失最严重的疫病之一。选取免疫原性良好的血清1型RA-sd3菌株和血清2型RA-sd2菌株,制备鸭疫里默氏杆菌高免血清,并建立了用于检测鸭血清中鸭疫里默氏杆菌抗体的微量凝集试验(Microagglutination test,MAT)方法。在96孔V型微量反应板中,用50μL0.85%的灭菌生理盐水将50u L待检血清进行倍比稀释后,加入50μL凝集抗原(OD600值=1.452),放置湿盒中37℃反应4h,即可观看反应结果。制备的凝集抗原在4℃条件下可保存5个月。此方法特异、敏感、成本较低、简单易行便于推广使用。选用免疫原性良好的鸭疫里默氏杆菌1型RA-sd3菌株和2型RA-sd2菌株接种胰蛋白胨大豆肉汤培养基,收获培养物,调节菌量为1.2×1010CFU/ml,用终浓度为0.3%的甲醛溶液灭活后等量混合,按照水相：油相=1：2的比例乳化制备鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗。用安全检验合格的疫苗颈部皮下免疫3-7日龄雏鸭,0.3ml/只,21天后攻毒保护率可达9/10以上,免疫保护期可维持两个月。

参考文献

[1]Vaccination of ducks with recombinant outer membrane protein(OmpA)and a 41 kDa partial protein(P45N′)of Riemerella anatipestifer[J].Bin Huang,Sumathi Subramaniam,Joachim Frey,Hilda Loh,Hai-Meng Tan,Charlene J Fernandez,Jimmy Kwang,Kim-Lee Chua.Veterinary Microbiology.2002(3)

[2]New serotypes of Riemerella anatipestifer isolated from ducks in Thailand[J].Pornpen Pathanasophon,Takuo Sawada,Tipa Tanticharoenyos.Avian Pathology.1995(1)

[3]Serotypes of’Pasteurella’anatipestifer isolates from ducks in Singapore:A proposal of new serotypes[J].Hilda Loh,T.P.Teo,Hui-Cheng Tan.Avian Pathology.1992(3)

[4]Immunogenicity and safety of a live Pasteurella anatipestifer vaccine in White Pekin ducklings:Laboratory and field trials[J].T.S.Sandhu.Avian Pathology.1991(3)

[5]程增青.鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及二价灭活疫苗的研制[D].南京农业大学,2011.