16HBE人支气管上皮细胞的应用

背景^[1]

细胞的培养采用小鼠气管和支气管上皮细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞（如脂肪细胞、纤维细胞等）的污染，同时保证质量的稳定。小鼠气管和支气管上皮细胞可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

16HBE人支气管上皮细胞的基本信息

形态：贴壁

细胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

传代方法：首次建议1:2-1:3 两天换液一次

冻存条件：90%FBS+10%DMSO

培养步骤

1.从动物胚胎或者一些刚出生的动物的器官或者组织上取得细胞,配制成细胞悬浮液.把细胞液放到培养瓶中,在培养箱里培养--------原代培养.

但是,不要以为这样就能一直无限培养下去.

因为16HBE人支气管上皮细胞在那个瓶壁上生长的时候,如果大量增殖,细胞之间会彼此相碰,细胞细胞就会停止分裂增殖,出现一种接触抑制.

2.我们为了它们能继续增殖,就用胰蛋白酶再把它们分开,然后再配制成细胞悬浮液,分开装到好几个瓶子里继续培养--------传代培养.

应用^[2]

人支气管上皮HBE细胞中p53相关的放射诱导表达长链非编码RNA的鉴定和生物功能预测分析

为研究与p53关联的lncRNA分子在放射损伤反应如上皮间充质转化中的作用机制提供信息。方法使用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建p53敲除的人支气管上皮细胞(HBEp53-/-),Western印迹法检测P53表达水平,lncRNA芯片杂交分析lncRNA表达谱的改变,实时定量RT-PCR分析验证部分lncRNA分子的表达变化,生物信息学技术分析差异变化lncRNA的生物学功能。

结果与野生型HBE细胞相比,HBEp53-/-细胞在照射后有239条lncRNA出现上调表达,287条出现下调表达。上调和下调表达前5位lnc RNA的差异表达变化经PCR得到验证。生物信息学GO分析表明,前10位差异表达的lncRNA的靶基因主要涉及β3肾上腺素受体结合蛋白、酪氨酸激酶活性蛋白、DNA结合蛋白、锌离子跨膜转运体蛋白、突触融合蛋白结合蛋白和泛素结合蛋白等分子功能。

参考文献

[1] 人支气管上皮HBE细胞中p53相关的放射诱导表达长链非编码RNA的鉴定和生物功能预测分析  胡赛黄瑞雪周平坤黄波