亮甲酚蓝的主要应用

背景及概述^[1]

亮甲酚蓝是一种化工染料。

应用^[1-3]

1)亮甲酚蓝染色对牛核移植胚胎体外发育的影响。为研究亮甲酚蓝(brilliantcresylblue，BCB)染色选择卵母细胞对牛核移植体系的影响，本实验以未进行染色处理的牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)作为对照组，在成熟培养前用26μmol/L亮甲酚蓝染色90min作为处理组，将处理组依照胞质的颜色分为蓝色组(BCB+)和无色组(BCB-)，分别在成熟培养后作为受体，经胞质内注射法构建牛体细胞核移植胚胎，统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数来评价其发育潜能。结果表明：BCB+组的成熟率(80.9%)与对照组(60.2%)和BCB-组(51.9%)差异显著(P<0.05)；BCB+组的囊胚率(32.26%)与对照组(21.49%)和BCB-组(5.95%)差异显著(P<0.05)，另外BCB+组的囊胚细胞总数(132.5)显著高于其他组(P<0.05)。结果显示，通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植，可以获得更高的克隆囊胚率。

2)亮甲酚蓝染色法评价斑马鱼卵母细胞体外成熟度的实验研究。过不同浓度亮甲酚蓝(BCB)对斑马鱼卵母细胞进行染色，探讨该方法用于判断鱼类卵母细胞成熟度的可行性，并利用该法对孕酮促斑马鱼卵母细胞体外成熟实验中的卵母细胞成熟情况进行了判断和分析。结果表明：(1)BCB染色法用于判断鱼类卵母细胞成熟度是可行的。(2)低浓度(1nmol/L和10nmol/L)孕酮处理6h，对斑马鱼卵母细胞的成熟并无明显促进作用，高浓度的孕酮(100nmol/L和1000nmol/L)不利于卵母细胞的成熟。(3)浓度为100nmol/L的孕酮处理12h，对卵母细胞成熟的促进作用显著。

3)亮甲酚蓝染色对水牛卵母细胞体外受精和孤雌激活胚胎发育的影响。探讨亮甲酚蓝(BCB)染色对水牛卵母细胞体外受精及孤雌激活胚胎发育的影响。卵丘卵母细胞复合体(COCs)在体外成熟培养前用浓度26μmol/L的亮甲酚蓝染色90min，然后根据卵母细胞胞质蓝色的有无分为阳性(BCB+，蓝色)和阴性组(BCB-，不着色)。以未经染色处理的COCs为对照组，控制对照组卵母细胞在含0.4%牛血清白蛋白(BSA)的杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)中孵育90min。体外成熟培养后统计各组的成熟率、体外受精和孤雌激活后的发育率。结果BCB+组的成熟率(65.70%)显著高于对照组(59.86%)、控制对照组(58.42%)和BCB-组(48.86%)。在体外受精后的囊胚发育率方面，BCB+组(27.08%)和对照组(25.49%)差异不显著，但显著高于控制对照组(20.50%)和BCB-组(8.45%)。在孤雌激活后的囊胚发育率方面，BCB-组显著低于其他各组，但BCB+组、对照组以及控制对照组之间无显著差异。亮甲酚蓝染色筛选出的阳性卵母细胞具有较好的核成熟发育潜能，但并不能显著提高卵母细胞体外受精及孤雌激活后的胚胎发育率。

主要参考资料

[1] 亮甲酚蓝染色对牛核移植胚胎体外发育的影响

[2] 亮甲酚蓝染色法评价斑马鱼卵母细胞体外成熟度的实验研究

[3] 亮甲酚蓝染色对水牛卵母细胞体外受精和孤雌激活胚胎发育的影响