大鼠淋巴成纤维细胞提取物的应用

背景^[1-6]

大鼠淋巴成纤维细胞提取物是从大鼠原代淋巴成纤维细胞提取的，大鼠原代淋巴成纤维细胞从正常大鼠淋巴组织制备可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

大鼠淋巴成纤维细胞分离自正常大鼠淋巴节，成纤维细胞是胚胎中胚层起源的间叶细胞。它们被广泛地用于细胞和分子方面的研究。这主要是因为纤维原细胞是体外培养中最容易生长的一类细胞，它们的耐久力使它们能够用于基因转染、显微注射等多种操作。有确凿的证据表明，在身体不同的部分的成纤维细胞有显著的不同。

组织中的成纤维细胞暴露在动态的机械环境中将影响健康的和正在愈合的软组织的结构完整性。纤维原细胞分泌富含I和，或III型胶原的细胞外基质。另外，有报道指出在淋巴增生疾病中成纤维细胞大量增长。大鼠淋巴成纤维细胞传10代以上仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。

另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。体外培养的成纤维细胞多为梭形、多角形和扁平星形等，其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。电镜下，其胞质可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和发达的高尔基复合体。处于成熟期或称静止状态的成纤维细胞，胞体变小，呈长梭形，粗面内质网和高尔基复合体均不发达。它具有较强的分裂增殖能力，适应性强，是最容易培养的动物细胞类型之一。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。根据不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型。

应用^[7][8]

大鼠淋巴成纤维细胞提取物可用于黄芪多糖对口腔黏膜成纤维细胞生物学行为及实验性阿弗他溃疡模型大鼠免疫状态影响研究

观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对原代培养口腔黏膜成纤维细胞(oral mucosa fibroblasts)生物学行为的影响。通过免疫法建立SD大鼠复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer,RAU)动物模型,研究黄芪多糖对实验性RAU大鼠模型外周血中T淋巴细胞及TNF-a含量的影响。

方法：1.采用改良组织块培养法体外原代培养口腔黏膜成纤维细胞,通过倒置相差显微镜观察其生物学特性,并用波形丝蛋白、角蛋白免疫细胞化学方法鉴定其来源。2.采用噻唑蓝比色法(MTT)观察正常培养下的口腔黏膜成纤维细胞经不同浓度黄芪多糖处理后细胞的增殖情况。同时采用考马斯亮蓝法检测口腔黏膜成纤维细胞蛋白总含量的变化。3.通过免疫方法建立SD大鼠RAU动物模型,将实验大鼠随机分为5组：正常对照组(A)、阴性对照组(B)、100mg/kg APS治疗组(C)、200mg/kg APS治疗组(D)、300mg/kg黄芪多糖治疗组(E)。连续灌胃20天后,提取大鼠口腔黏膜做组织病理学观察,并分别采用流式细胞技术(FCM)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组SD大鼠外周血中T淋巴细胞亚群数量和TNF-a表达水平的变化。

结果：

1.口腔黏膜成纤维细胞的鉴定原代培养3-14天左右可见有成纤维细胞从组织块周边游出,镜下观察细胞呈长梭形,有数个长短不一的突起,胞体丰满,细胞以组织块为中心呈放射状或旋涡状排列。免疫组化显示：波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。

2.黄芪多糖对口腔黏膜成纤维细胞增殖的影响与对照组相比,作用24h、48h,黄芪多糖2.5μg/ml 10μg/ml 40μg/ml组均能明显促进细胞增殖(P<0.05),作用72h,黄芪多糖10μg/ml 40μg/ml 160μg/ml组能促进细胞增殖(P<0.05),且160μg/ml的黄芪多糖表现出最明显的促细胞增殖作用,2.5μg/ml黄芪多糖组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。

3.黄芪多糖对口腔黏膜成纤维细胞蛋白总含量的影响与对照组相比,黄芪多糖作用72h时10μg/ml 40μg/ml 160μg/ml组细胞蛋白总含量均显著升高(P<0.05),且160μg/ml黄芪多糖组细胞蛋白总含量增高最显著,2.5μg/ml黄芪多糖组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。

参考文献

[1]Chemical analysis of Astragalus mongholicus polysaccharides and antioxidant activity of the polysaccharides[J].Hui Yan,Yupeng Xie,Shiguang Sun,Xiaodi Sun,Fengxia Ren,Qirong Shi,Suhui Wang,Weidong Zhang,Xiumin Li,Jing Zhang.Carbohydrate Polymers.2010(3)

[2]Astragalus polysaccharide and oxymatrine can synergistically improve the immune efficacy of Newcastle disease vaccine in chicken[J].Yuku Chen,Deyun Wang,Yuanliang Hu,Zhenhuan Guo,Junmin Wang,Xiaona Zhao,Yunpeng Fan,Liwei Guo,Shujuan Yang,Fuding Sai,Yujuan Xing.International Journal of Biological Macromolecules.2010(4)

[3]Extraction,characterization of Astragalus polysaccharides and its immune modulating activities in rats with gastric cancer[J].Rui Li,Wei-chang Chen,Wei-peng Wang,Wen-yan Tian,Xue-guang Zhang.Carbohydrate Polymers.2009(4)

[4]Immune‐expression of HSP27 and IL‐10 in recurrent aphthous ulceration[J].Nelson T.Miyamoto Jr,Ricardo CarneiroBorra,MarildaAbreu,Luc Louis MauriceWeckx,MarcelloFranco.Journal of Oral Pathology&Medicine.2008(8)

[5]Effect of Lentinus edodes polysaccharide on oxidative stress,immunity activity and oral ulceration of rats stimulated by phenol[J].ZhanHai Yu,Yin LiHua,Yang Qian,Liu Yan.Carbohydrate Polymers.2008(1)

[6]A simple and established method of tissue culture of human gingival fibroblasts for gingival augmentation[J].Saczko,Jolanta,Dominiak,Marzena,Kulbacka,Julita,Chwilkowska,Agnieszka,Krawczykowska,Honorata.Folia Histochemica et Cytobiologica.2008(1)

[7]Oral mucosal disease:Recurrent aphthous stomatitis[J].Crispian Scully,Stephen Porter.British Journal of Oral&Maxillofacial Surgery.2007(3)

[8]薄磊.黄芪多糖对口腔黏膜成纤维细胞生物学行为及实验性阿弗他溃疡模型大鼠免疫状态的影响[D].兰州大学,2011.