利巴韦林杂质A的制备

概述^[1]

利巴韦林为一种强的单磷酸次黄嘌呤核苷(IMP)脱氢酶抑制剂。通过抑制IMP，从而阻碍病毒核酸的合成，具有广谱抗病毒性能，但临床评价不一。本品对流行性出血热有效。对早期患者疗效明显，有降低病死率、减轻肾损害、降低出血倾向、改善全身症状等作用。口服：1日0.8～1g，分3～4次服；肌注：1日10～15mg/kg，分2次给药，其溶液可用于滴眼、滴鼻。本品有致畸作用。孕妇禁用。利巴韦林杂质A为利巴韦林制备过程中产生的杂质。

制备^[1]

利巴韦林杂质A制备如下：将细菌加入到pH值为7.0的能量源为Na2S2O3富集的无菌营养培养基中，并将所得的接种培养基在50℃下通气温育18小时。完成获得所需生物量的培养后，通过以2700rpm离心分离细菌，并将沉淀的细胞重悬于蒸馏水中，并充分混合。向pH6.8的反应混合物中加入120mM尿苷，100mMTCA和50mMKH2PO4，将未处理的Thermothrixthioparasp完整细胞的细菌生物质引入，使湿生物质的终浓度为58mg/ml反应混合物。将反应混合物连续混合并在60℃下孵育24小时。在孵育过程中，活细胞逐渐溶解在反应混合物中（由于任何营养物质的缺乏和反应介质的高渗性）。孵育结束后，将反应混合物离心，并除去沉淀物。通过在90℃下加热20分钟对上清液进行热处理以使酶失活并使蛋白质变性和沉淀。如此获得的上清液在真空下浓缩至通过HPLC测得的尿嘧啶浓度为20-40mg/ml，在该浓度下，除去了大部分残留量的尿嘧啶和TCA以及部分尿苷。在将溶液的pH调节至9后，分离出量的无机磷酸盐。将获得的上清液调节至pH11.5，并加到装有强阴离子型Dowex1×8Cl-型的离子交换柱上。利巴韦林用水从色谱柱上洗脱下来，而残留量的尿苷，尿嘧啶，三氯乙酸，尿苷单磷酸酯和无机磷酸酯残留在色谱柱上。使水洗出液通过Dowex 50W，H+型离子交换树脂，而在柱子上则留有痕量的阳离子形式的杂质利巴韦林杂质A。

主要参考资料

[1] WO9516785A1 USE OF THERMOPHILIC BACTERIA TO MANUFACTURE TRIAZOLE NUCLEOSIDES