对羟基苯丙氨酸的应用

概述 ^[1]

对羟基苯丙氨酸（tyrosine；Tyr）是人类成长过程中必不可少的氨基酸，如果体内缺乏酪氨酸则可能会导致出现智能下降，白化病等症状。当前国内外已普遍开始重视食品中酪氨酸含量的添加。因此，准确、灵敏的测定酪氨酸在营养学和临床医学上具有重要意义。由于DL-m-酪氨酸（间羟基苯丙氨酸）和L-酪氨酸（对羟基苯丙氨酸）分子式相同、结构相近，因此使得他们的一些物理和化学性质也相似，且两者的外观也极为相似，导致两者难以区分。目前虽然已有很多报道关于定量分析酪氨酸浓度的方法，例如HPLC、电化学分析法、化学发光法、毛细管电泳法。但是，关于对DL-m-酪氨酸（间羟基苯丙氨酸）和L-酪氨酸（对羟基苯丙氨酸）两种同分异构体的区分鉴别尚无报道。因此，迫切需要一种鉴定效果好且操作简便快速、结果容易判断的方法来鉴别这两种物质。

应用^[2]

对羟基苯丙氨酸是尿液检测剂，用于检测早期癌症，主要就是检测对羟基苯丙氨酸在尿液中的含量。肿瘤标志物中，对羟基苯丙氨酸及其代谢物在尿液中异常的肿瘤生命体中，所以被众检用来当做筛查标志物，准确度极高。

研究表明，对羟基苯丙氨酸的代谢紊乱不仅导致多种氨基酸代谢疾病的发生，而且与恶性肿瘤有一定的相关性。因此，研究人体体液中酪氨酸及其代谢产物的含量变化，对于多种疾病的辅助诊断、疗效监测病因学等方面的研究意义重大。

现有文献记载中，癌症患者尿液中的对羟基苯丙氨酸浓度较正常人群会有明显升高，对羟基苯丙氨酸作为一个新的肿瘤标志物逐渐开始被广泛关注。目前，已报道的对羟基苯丙氨酸检测方法多是检测试剂与对羟基苯丙氨酸结合形成特定颜色，并与标准色卡对比，得出阳性或阴性的结论。这种方法只可进行简单的定性而不可进行定量，且该方法干扰因素较多，易形成假阳性或假阴性。

检测^[3]

1.仪器与药品

高效液相色谱仪：岛津NexeraXR，泵：LC-20ADXR，自动进样器：SIL-20ACXR，柱温箱：CTO-20A。质谱仪：ABSCIEXAPI4000，离心机：ThermoSORVALLST8R。

对羟基苯丙氨酸购自中检所，同位素内标液L-对羟基苯丙氨酸-D2购自于TLC公司。

2.色谱检测条件

色谱柱：ThermoC183um（2.1×100mm）色谱柱，流动相A相为0.1%（v/v）的甲酸，B相为乙腈，流速为0.2-0.3ml/min，柱温40℃，进样体积5ul。

3.储备液的制备

对羟基苯丙氨酸储备液的制备：称量对羟基苯丙氨酸10mg，用电动移液器加入超纯水使有效浓度为1mg/ml，标记为stock1。

L-对羟基苯丙氨酸-D2储备液的制备：称量L-对羟基苯丙氨酸-D210mg，用电动移液器加入超纯水使有效浓度为1mg/ml，标记为stock2。

4.标准曲线溶液的制备

将储备液stock1用超纯水逐级稀释到2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml，100ng/ml，50ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，1ng/ml，分别取上述各浓度溶液190ul，加入储备液Stock210ul，混合均匀，得到对羟基苯丙氨酸的标准曲线溶液。

5.待测尿液样本的制备

取人体尿液样本1ml，1500×g/min离心10-15min，取上清液，稀释50倍，过0.22um微孔滤膜，取190ul滤液加入10ul储备液Stock2，混合均匀。

6.线性分析

取步骤4获得的对羟基苯丙氨酸的标准曲线溶液进行液相质谱检测，采用液相色谱-质谱仪连用进行检测，对羟基苯丙氨酸的色谱检测条件为步骤2所述条件。以标准曲线中校正浓度理论值为横坐标，以对羟基苯丙氨酸与同位素内标的面积比值为纵坐标进行线性回归分析。回归曲线方程为y=4.31e+003x+1.53e+004（r=0.9991），权重系数为1/x2。

7.待测尿液样本检测

选取步骤5制备的尿液样本200份进行液相质谱检测，采用液相色谱-质谱仪连用进行检测，检测结果带入步骤6的标准曲线方程，得到尿液样本中对羟基苯丙氨酸含量。其中值为39407ng/ml；最小值为1260ng/ml；均值为11088ng/ml，阳性率为6%。

主要参考资料

[1] 黄学梅, 吴立翔, 吕自兰, 李影, & 郭变琴. . 尿液对羟基苯丙氨酸检测在恶性肿瘤早期预测中的应用价值. 检验医学与临床(16), 40-42.

[2] 徐卫益, 许青, & 陈保德. (2016). 尿液对羟基苯丙氨酸水平在癌症筛选中的应用研究. 国际检验医学杂志(21), 2967-2969.

[3] 王新宇. . 对羟基苯丙氨酸（酪氨酸）尿液检测在乳腺肿瘤诊疗中的应用. (Doctoral dissertation, 吉林大学).