9035-81-8

方法一、牛肺为原料
提取、盐析 将新鲜或冰冻牛肺绞碎后，用5倍量水搅匀，2.5mol/L硫酸调节pH为2，搅拌提取8h，过滤，滤渣同法再提取1次，合并两次提取液，每升加硫酸铵277g，用5mol/L硫酸调pH为1.5，放置过夜。
新鲜牛肺（或冰冻[水, H2SO4]→[pH2, 8h]提取液[(NH4)2SO4]→[pH1.5]盐析物
去杂蛋白 将盐析物除去上清液，过滤，滤液用氢氧化钠液调pH至5.5，再每升加硫酸铵255g，搅匀后静置48h，过滤，得盐析物。用9倍量水溶解盐析物，搅拌2h后，置冰箱过夜，过滤，滤液中加入1/20量的三氯乙酸 (50%)，速加热至80℃后，即冷却至30℃以下，过滤。
盐析物[(NH4)2SO4]→[pH5.5, 48h]盐析物[三氯乙酸]→[先80℃, 后30℃]滤液
盐析、溶解、盐析 滤液用氢氧化钠(5mol/L)调pH为3，按每升加入硫酸铵610g搅拌使溶解，静置过夜。取沉淀物，用4倍量新配制的pH5.5的 0.1mol/L乙酸钠缓冲液和1倍量0.4mol/L硼酸缓冲液溶解，按每升加入硫酸镁 1050g溶解，过夜，次日过滤，析出盐析物。
滤液[NaOH, (NH4)2SO4]→[pH3]沉淀物[NaAc,硼酸缓冲液，MgSO4]→[pH5.5]盐析物
透析、脱盐、沉淀 加4倍量水使盐析出物溶解，用流动自来水于10℃以下透析24h，加硅藻土过滤，滤液用强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7与强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×7(按201×7树脂：001×7树脂=3:1的比例)搅拌吸附20min，至无硫酸根离子。将树脂滤过，脱盐液(pH7左右)加0.9%氯化钠和1.5倍量丙酮析出沉淀，过滤，滤液再加4倍量丙酮析出沉淀，过夜。然后沉淀用丙酮、乙醚洗涤，干燥。
盐析物[水]→[10℃以下]滤液[阴离子、阳离子树脂]→脱盐液[NaCl, 丙酮]→[pH7]沉淀物
去热原、沉淀、干燥 沉淀物用60倍量80%甲醇溶液溶解，于冰浴搅拌2h，过滤，按滤液体积的1%加30%的氯化钠溶液和5倍量丙酮，沉淀过夜，离心，用丙酮洗涤，干燥，得沉淀物。再用60倍量无热原水溶解，5mol/L氢氧化钠调节pH至11，置冰箱中4d，过滤，滤液用冰醋酸调为pH 4-5后，加入1%量的300g/L氯化钠溶液和5倍量丙酮，析出沉淀，过夜，用丙酮、乙醚洗涤，干燥，即得成品。
沉淀物[蒸馏水，NaOH]→[pH11]无热原液[冰HAc, NaCl, 丙酮]→[pH4-5]成品
方法二、以人尿为原料的人尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)提取法
原料处理、酸化 取新鲜男性尿100L<操作全过程在0-4℃下进行)，经双层纱布过滤，用1mol/L NaOH液调节pH至8.5，得白色絮状沉淀物，静置2h，弃去沉淀得上清液，搅拌下缓缓滴加1mol/L HCl调pH4.0，生成细微沉淀，离心20min，除沉淀得酸化尿液。
男性人尿[1mol/L NaOH]→[pH8.5]上清液[1mol/L HCl]→[pH4.0]酸化尿液
吸附、洗脱 取Polyerde Ⅳ500g加入酸化尿液中，搅拌吸附2h，过滤，弃去滤液，吸附剂用常水洗涤至白色，再用2 mol/L NH4HCO3液4L进行洗脱，收集洗脱液。
酸化尿液[Polyerde IV]→吸附物[2 mol/L NH4HCO3]→洗脱液
盐析、透析、浓缩、干燥 将固体(NH4)2SO4加入洗脱液中，达80%饱和度，于4℃下静置4-5h，离心30min，收集沉淀，再将沉淀溶于适量的蒸馏水中，加磷酸盐缓冲液透析至盐除尽，得透析液。将透析液浓缩，冷冻干燥，即得UTI成品。
洗脱液[(NH4)2SO4, 磷酸盐缓冲液]→[4℃, 蒸馏水]透析液[（浓缩，冷冻）]→UTI成品。

胰蛋白酶抑制剂是抑制胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶抑制剂，可能是外源性或内源性化合物。