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柠檬酸(citric acid, CA)含量测定试剂盒

citric acid
1500 1盒 起订
上海 更新日期:2024-12-25

上海雅吉生物科技有限公司

VIP3年
联系人:王源
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邮箱:yajikit@163.com

产品详情:

中文名称:
柠檬酸(citric acid, CA)含量测定试剂盒
英文名称:
citric acid
CAS号:
保存条件:
2-8℃
产品类别:
试剂盒 生化试剂盒

柠檬酸(citric acid, CA)含量测定试剂盒说明书

                                                  
                                                       分光光度法50/48

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

CA是生物体内常见的有机酸,是重要的食品风味物质。此外,CA是三羧酸循环步反应的产物。


柠檬酸(citric acid, CA)含量测定试剂盒测定原理:

酸性条件下,柠檬酸还原Cr6+生成Cr3+,在545nm处有特征吸收峰;通过测定545nm吸光值的增加,即可计算出样品中柠檬酸含量。


自备仪器和用品

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。


试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体×1支,-20℃保存。

试剂四:粉剂×1瓶,室温保存。临用前配制,加入5mL试剂一,充分溶解。

试剂五:液体×1瓶,4℃避光保存。

标准品:液体×1支,250μmol/L柠檬酸标准液,4℃保存。


样品处理

1. 液体样品:取0.1mL液体加试剂一0.9mL,充分混匀,11000g 4℃离心10min,取上清液待测。

2. 组织:按照组织质量(g:提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。11000g4离心10min,取上清置冰上待测。

3. 线粒体:按照组织质量(g:提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,600g/min4℃离心5min;取上清至另一EP管中,11000g4℃离心10min,弃上清(此上清液可用于细胞质CA含量测定);向沉淀中加试剂二200μl,以及试剂三2μl,充分悬浮溶解,11000g4℃离心10min,取上清液待测。

4. 细菌、真菌中:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);11000g4离心10min,取上清置冰上待测。


柠檬酸(citric acid, CA)含量测定试剂盒测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到545 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂一置于30℃水浴中预热30min

3. 空白管:取EP管,依次加入100μL蒸馏水,700μL试剂一,100μL试剂四,100μL试剂五,混匀后室温静置30min,于545nm测定吸光度,记为A空白管。

 

4. 标准管:取EP管,依次加入100μL标准液,700μL试剂一,100μL试剂四,100μL试剂五,混匀后室温静置30min,于545nm测定吸光度,记为A标准管。

 

5. 测定管:取EP管,依次加入100μL上清液,700μL试剂一,100μL试剂四,100μL试剂五,充分混匀后室温静置30min,于545nm测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。


计算公式:

1. 按液体样品的体积计算

柠檬酸含量(nmol/L= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×样品稀释倍数×V

= 2500×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

C标准液:250μmol/L=0.25 m mol/L;样品稀释倍数:(0.1 mL样品+0.9mL试剂一)÷ 0.1 mL样品=10V总:1mL

2. 按组织质量计算

柠檬酸含量(nmol/g 鲜重= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V÷W

= 250×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

C标准液:250 μ mol/LV总:上清液总体积,1.0 mL=0.001 LW:样品质量,g

3. 按蛋白含量计算

柠檬酸含量(nmol/mg prot= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷Cpr

= 250×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

C标准液:250 μ mol/L=0.25μ mol/mLCpr:上清液蛋白质含量,mg/mL

4. 按细胞数量计算

柠檬酸含量(nmol/104 cell= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V÷细胞数量

= 250×(A测定管-A空白管) ÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

C标准液:250 μ mol/LV总:上清液总体积,1.0 mL=0.001 L

 

注意事项:

1. 样品处理等过程均需要在冰上进行。

2. 试剂四需现配现用,配置好的一周内使用完

3. 试剂五为易致癌物质,实验过程中,需佩戴手套,避免试剂五溅到皮肤上。

4. 柠檬酸提取液不能用于蛋白含量测定,如需测定蛋白含量,需另取组织,使用本公司BCA试剂盒进行测定。


柠檬酸(citric acid, CA);柠檬酸(citric acid, CA);

公司简介

上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。 公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。 本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。

成立日期 (14年)
注册资本 50.000000万人民币
员工人数 50-100人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 试剂,定制,试剂,定制
主营行业 抗体,抗体

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