REAL TAQ DNA聚合酶

Real Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的，其分子量为94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。在PCR反应中，Real Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2 kb/分钟，产物3’端带A，可直接用TA载体克隆。 TaqDNA聚合酶是一种耐高温的依赖于DNA模板的DNA聚合酶，来源于极度嗜热的嗜热水生菌Thermus aquaticus YT一1，故称作Taq DNA聚合酶，一般应用于PCR反应。TaqDNA聚合酶是一种Mg2+依赖酶，反应体系中必须有Mg2+存在，然而保持适当的Mg2+浓度十分重要，因为Mg2+浓度过高或过低均会影响引物与模板的结合、模板与PCR产物的解链温度、引物二聚体的形成以及酶的活性与精确性。 一般用于DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于T/A载体克隆。 ①热稳定性高，92.5℃、95℃、97.5℃时的半衰期分别为130min、40min和5～6min；②最适反应温度为75℃，引物在50℃～60℃退火，72℃延伸，可防止引物与模板间的错配及DNA二级结构的形成，从而提高了扩增特异性，且有利于扩增较长的片段，70℃时延伸速率在60核苷酸/秒以上；③可延迟平台区，平台区到达之前即可完成25次循环，扩增倍数达4 X 106，然而该酶存在一个致命的缺点，即缺乏3’一5’外切酶活性，无法校正错误核苷酸的掺入．