INVSC1感受态细胞

INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母，pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用，激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA板进行筛选。 INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pYES2质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。INVSC1是酿酒酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。 1.取100μl冰上融化的INVSc1感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5μg，Carrier DNA(95-100℃，5 min，快速冰浴，重复一次)10μl，PEG/LiAc 500μl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min(15 min时翻转6-8次混匀)。 2.将管放42℃水浴15 min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。 3.5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400μl重悬，离心30s弃上清。 4.ddH2O 50μl重悬，涂质粒筛选用：SD-U medium板，29℃培养48-96 h。 酿酒酵母适宜的生长温度是28-30度，一般使用30度培养，温度超过32度可能导致细胞的死亡。