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LBA4404 ELECTRO感受态细胞

LBA4404 ELECTRO感受态细胞

英文名称:LBA4404 ELECTRO Competent Cells
CAS号:
分子式:
分子量:0
EINECS号:
Mol文件:Mol File
LBA4404 ELECTRO感受态细胞 结构式

LBA4404 ELECTRO感受态细胞 用途与合成方法

LBA4404菌株为Ach5型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。 1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。 2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入0.01-1μg质粒DNA(体积不大于6ul,感受态转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。 3.启动电转仪,设置参数:C=25μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入700μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。 4.6000 rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时,28℃培养48 h即可;平板中同时加入50μg/ml kan,20μg/ml rif时,需28℃培养60 h;如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90 h)。 用于微紫青霉菌菌株GXCR遗传转化体系的建立:建立由根癌农杆菌LBA4404介导的GXCR菌株的遗传转化体系,为从基因水平上研究该菌株对重金属盐抗性的可能机制提供基础。 strep,赋予LBA4404菌株链霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。

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中文名称:LBA4404 ELECTRO感受态细胞

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LBA4404 ELECTRO感受态细胞
上海联迈生物工程有限公司 2024-04-27

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