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INVSC1感受态细胞

INVSC1感受态细胞,,结构式
INVSC1感受态细胞
  • CAS号:
  • 英文名:INVSC1 competent cells
  • 中文名:INVSC1感受态细胞
  • CBNumber:CB84809612
  • 分子式:
  • 分子量:0
  • MOL File:Mol file

INVSC1感受态细胞性质、用途与生产工艺

  • 背景 INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母,pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用,激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型,可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA板进行筛选。
  • 细胞特性 INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pYES2质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。INVSC1是酿酒酵母菌株,属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的,因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染,往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素,来抑制细菌菌的污染和生长。
  • 操作方法 1.取100μl冰上融化的INVSc1感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5μg,Carrier DNA(95-100℃,5 min,快速冰浴,重复一次)10μl,PEG/LiAc 500μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min(15 min时翻转6-8次混匀)。 2.将管放42℃水浴15 min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。 3.5000 rpm离心40 s弃上清,ddH2O 400μl重悬,离心30s弃上清。 4.ddH2O 50μl重悬,涂质粒筛选用:SD-U medium板,29℃培养48-96 h。 酿酒酵母适宜的生长温度是28-30度,一般使用30度培养,温度超过32度可能导致细胞的死亡。
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