黄体生成素-释放激素

黄体生成素-释放激素又称促黄体素释放激素，简称LRH或LH-RH。鱼类及其他脊椎动物下丘脑分泌的刺激脑垂体释放促黄体生成素(LH)的一种激素。由下丘脑的结节外侧核和视前核神经细胞所分泌，通过轴突或经血液传至垂体腺体部，不但刺激其释放促黄体生成素，还释放促滤(卵)泡激素(FSH)，从而促使性腺发育、成熟和排卵。LRH是一种人工合成的制品10肽，对牛、羊、猪、大白鼠和人等均呈现很高的生物活性，但对鱼类的催产效果则较低。改变LRH的构型，合成9肽的类似物(LRH-A)，对草鱼、青鱼、鲢、鳙、鲮等均有很高的生物活性，在中国已成为应用广泛的一种鱼类催产剂。 LHRH的两种分泌方式：①持续性微量基础分泌。这种分泌方式虽不能刺激GTH的释放，但对LHRH本身作用和它的受体起自身预激作用；②间断脉冲式释放。这种激放方式是刺激LH与之同步释放的关键，首次由去卵巢猴门脉循环连续频繁取血并测定LHRH和LH含量所证实汇。 LHRH调控着垂体内促黄体生成激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的分泌.下丘脑LHRH的结构阐明和人工合成，明确了中枢神经系统对垂体的控制作用，大大推动了神经内分泌学和生殖生理学的发展.为了寻找非甾体避孕药和治疗性激素依赖性的癌症(如前列腺癌、子宫癌)，人们已合成出5000多种LHRH类似物，其中少部分为激动剂(agonists)，大部分为拮抗剂(antagonists).高活性的LHRH激动剂，用于治疗癌症及用作避孕药，已有产品在市场上出售。 LH-RH及其衍生物具有促进促性腺激素泌的活性，按序给药LH-RH及其衍生物可抑制性腺功能，因此其可以用作药物以抑制和/或治疗诸如子宫内膜异位、中枢性早熟、不育和前列腺癌等疾病。 本试剂盒用于检测绵羊血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中促性腺激素释放激素（GnRH）的含量。   本试剂盒应采用双抗体夹心法测定标本中绵羊促性腺激素释放激素（GnRH）水平。用纯化的促性腺激素释放激素（GnRH）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入促性腺激素释放激素（GnRH），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促性腺激素释放激素（GnRH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中促性腺激素释放激素（GnRH）含量。   1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。