三七提取物

三七提取物为五加科人参属植物人参三七块根的提取物，主含皂甙类成分，具有散瘀止血，消肿定痛功效，用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑损伤。
【生境分布】野生于山坡丛林下，今多栽培于海拔800～1000m的山脚斜坡、土丘缓坡上或人工荫棚下。分布于江西、湖北、广东、广西、四川、云南等地。野生者已少见，多为栽培。
【外观形态】为多年生草本，高30～60cm，根茎短，初生2～3年内直生，以后斜生，主根粗壮肉质，侧根圆锥形或圆柱形，常有疣状突起的分枝，长2～4cm，径约1cm，干时有纵条纹。茎单一，直立，不分枝，无毛。掌状复叶，3～4片轮生于茎顶;叶柄长4～9cm;托叶卵形或披针形，长5～6cm，小叶片通常5～7，罕为3或9，薄膜质，小叶柄长2～10mm，小叶为长圆状倒卵形，中央的小叶长9～10mm，宽3.5～4cm，侧生者较小，先端长渐尖，两面脉上均有刚毛，侧脉8～10对，网脉明显。伞形花序单个顶生，直径3～4cm，有花70～100朵，花柄被微毛;有时杂性，花柄纤细，长约1cm;苞片鳞片状;花萼杯状，5齿裂;花瓣5，黄绿色;雄蕊5;子房下位，2室，花柱2。核果，浆果状，近肾形，长6～9mm，成熟时红色;种1～3粒，扁球形，白色。花期6～8月，果期8～10月。

图1为三七 三七中含有多种达玛烷型四环三萜皂苷的活性成分。从根中分得人参皂苷-Rb1、-Rd、-Re、-Rgl、- Rg2、-Rhl，20-O-葡萄糖人参皂苷Rf，三七皂苷-R1、- R2、-R3、-R4、-R6、-R7，绞股兰苷XVII;从块状根茎中分得：人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rd、-Re、-Rg1和三七皂苷 R1;从绒根中分得：人参皂苷-Rb1、Rg1、Rh1和达玛-20 (22)-烯-3β，12β，25-三醇-6-O-B-D-吡喃葡萄糖苷等;从芦头中分得：人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rh1，三七皂苷R1、R2、R4。又从根的水溶性部分中分得止血有效成分田七氨酸，又称三七素，为一种特殊氨基酸，其结构为β -N-草酰基-D-α-β-二氨基丙酸，含量达0.90%，同时还分得它的旋光异构体β-N-草酰基-D-α-β-二氨基丙酸，也有止血活性，但含量甚微;还含天冬氨酸(aspartic acid)、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸等16种氨基酸，其中7 种为人体必需的，总氨基酸的平均含量为7.73%。根还含抗癌多炔成分：人参炔三醇。
从根中还得到具有活性的三七多糖A，是一种阿拉伯半乳聚糖。又含铁、铜、钴、锰、锌、镍、钒、钼、氟等无机元素。 对血液与造血系统的作用：三七具有较强止血作用、抗血小板聚集及溶栓作用、溶血作用，造血作用。
抗炎作用：三七根的水提物50～200mg/kg皮下注射，对用透明质酸酶、软骨素酶ABC、α-糜蛋白酶和组胺所引起的皮肤血管通透性增加可抑制11%～36%。三七根总皂苷、对角叉菜胶、高岭土、5-羟色胺、蛋清、透明质酸酶引起的小鼠或大鼠踝关节肿胀、足肿胀等有抑制作用。此外，三七总皂苷对二甲苯和巴豆油所致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用。
对免疫功能的影响：三七总皂苷160mg/kg可使小鼠溶血空斑数增加92%，还可提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数。能显著增加大鼠肺泡巨噬细胞吞噬率、提高血中白细胞总数和淋巴细胞百分比，减少白细胞移行指数。
抗氧化与抗衰老作用：三七皂甙有一定的消除O2-作用，强于人参总皂甙和绞股蓝总皂甙。三七粉浆200mg/kg给大鼠灌胃，连续4周，能使血液中脂质过氧化物(LPO)含量显著降低。各组织中只有脑组织中LPO减少十分显著，三七给药后，大鼠血液中的SOD活性有升高倾向，但无显著差异。在所测组织匀浆中，只有脑组织的SOD活性升高显著，其他组织均无显著改变。三七及茎叶总皂甙亦能延长果蝇的平均寿命，提高其飞翔能力，降低头部脂褐素含量，抑制小鼠体内外组织的LPO生成并提高小鼠血、脑组织SOD活性。提示三七有延长寿命和增强机体活力的作用。其抗衰老的机制可能通过直接减少自由基的形成，抑制体内脂质过氧化及激活性SOD活性，从而加速自由基清除，降低自由基对机体结构与功能的损害有关。
抗肿瘤作用：三七皂苷Rb1120 μg/ml能使培养的肿瘤细胞92%受到抑制，而培养的正常细胞只有29%受到抑制， Rd对培养的瘤细胞也有明显抑制作用。皂苷Rh1，对离体肝癌细胞也有抑制作用，它直接作用于细胞膜。皂苷Rh2 可抑制小鼠黑色素瘤(B16)的生长，呈浓度依赖关系，并能使癌细胞再分化诱导逆转成非癌细胞。
对肝功能的影响：三七总皂苷对四氯化碳造成大鼠肝损伤具有防治作用，使大鼠三磷酸腺苷酶、5-核苷酸酶活性增强三酰甘油明显降低。三七总皂苷对四氯化碳损伤的大鼠离体灌流肝具有保护作用，可使肝灌流量增加，降低灌流液中的丙氨酸转氨酶(ALT)，减轻肝脏的病理损伤，其保肝作用机理可能与其改善肝内微循环有关。三七总皂苷对肝脏缺血再灌注损伤亦有保护作用。
降血糖作用：三七总皂苷40%以上为三七皂苷C1，腹腔注射C1400mg/kg能使四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖降低 34%，效应随连续给药而增强，并呈量效关系，与胰岛素的降糖效应无协同或拮抗作用。小鼠腹腔注射三七总皂苷 210mg/kg或Rg1100mg/kg，三七总皂苷能使小鼠空腹血糖轻度升高，但维持时间不长，Rg1使小鼠空腹血糖先升高后降低，三七提取物A-J(主要含人参三醇皂苷)使正常小鼠肝糖原含量升高，促进外源性葡萄糖生成肝糖原，能提高空腹血糖，对葡萄糖性高血糖有降低倾向，显示出双向调节性作用。
其他作用：三七总皂苷具有促进生长作用，能明显增加小鼠的体重，具有雄性激素样作用，能明显增加大鼠精囊重量，三七总皂苷还有抗溃疡作用，犬静注对幽门结扎所致大鼠溃疡有显著的抑制作用。三七水浸剂及三七总皂苷对多种细菌及真菌有抑制作用。 （1）抗心律失常作用：三七总皂苷对各种药物诱发的心律失常，均有保护作用。三七总皂苷注射液对静注毒毛花苷 G或毒毛花苷K诱发的犬室性心律失常有明显的治疗作用，其效果与利多卡因相近。
（2）抗动脉粥样硬化作用：三七总皂苷能抑制3H-胸腺嘧啶核苷掺入体外培养的家兔主动脉平滑肌细胞及细胞增殖，能显著抑制低浓度高脂血清对3H-胸腺嘧啶核苷掺入细胞增值的促进作用，提示三七总皂苷对于动脉粥样硬化的发生及发展具有一定影响。
（3）耐缺氧及抗休克作用：三七总皂苷能明显降低心肌氧耗量和氧利用率，具有改善心肌氧代谢的作用;三七总皂苷可延长小鼠耐受常压窒息性缺氧的存活时间;三七总皂苷对家兔失血性休克的心功能有保护作用，可提高最大失血量和促进血压的恢复。增加机体对失血的耐受性，能降低心脏后负荷，减少心肌泵血阻力，显著延长休克动物的存活时间。
（4）对脑缺血的影响：三七总皂苷能扩张脑血管，增加脑血管血流量。大鼠脑缺血前给予三七总皂苷200mg/kg，能明显降低缺血和再灌注期纹状体细胞外液次黄嘌呤、黄嘌呤和肌苷含量的升高[27]。在家兔完全性脑缺血模型中，三七总皂苷在再灌注3h后可使家兔脑静脉血中的血栓素B2水平、血栓素B2/6-酮-前列腺素F1α比例、脑静脉血、脑脊液中肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性以及大脑皮质水、钠、钙含量均显著低于缺血对照组，三七皂苷组的大脑皮质结构损伤程度明显减轻。
（5）对血压的影响：三七总皂苷能明显降低犬动脉血压和总外周阻力。三七注射液静脉注射对兔肺动脉压、兔体动脉压有明显的降压作用，增大静脉注射量可以增加三七降低肺、体动脉压强度和维持时间，并延长减慢心率的作用维持时间。三七总皂苷对颈内动脉的扩张作用弱于对肠系膜前动脉的扩张作用，具有明显的作用选择性。
（6）对心脏的影响：三七总皂苷对心脏具有负性频率和负性肌力作用，并表现出明显的剂量和频率依赖性，其负性频率作用与阻断慢钙通道有关。静脉注射三七总皂苷，能对抗由脑垂体后叶素引起的心肌缺血的效应。
（7）抗冠心病作用：三七对冠心病、心绞痛有较好疗效。研究证明，三七绒根的乙醇提取物可使冠脉流量增加，提高心肌营养性血流量，降低心肌耗氧量，从而改善冠心病患者供血、供氧、恢复心肌供氧和耗氧之间的平衡。三七注射液亦能增加冠脉血流量，降低心肌耗氧量。其抗冠心病的有效成分主要是所含的黄酮甙和三七皂甙。黄酮甙有扩张冠脉作用; 三七皂甙能提高心肌细胞耐缺氧能力，降低心肌耗氧量，其降低心肌耗氧量作用主要是由于三七皂甙扩张外周血管、降低动脉血压而使心脏负荷降低所致。 三七总皂苷可溶于水和乙醇，但考虑三七中含有大量淀粉，不宜采用水或低浓度乙醇，以免糊化；为此，选择75%乙醇作为提取溶剂。
渗漉法：将三七粉碎成粗粉(20-40目),用75%乙醇浸泡12h后,以约2mL/kg·min－1度缓缓渗辘,收集相当于三七选定倍量的渗渡液即得减压浓缩真空干燥。
热浸法：将三七粉碎成粗粉（20-40目），75%乙醇浸泡12h，60°C热浸提3次,每次浸提时间约lh,收集合并滤液,减压浓缩、真空干燥。
热回流法：将三七经粉碎成粗粉（20-40目），加入75%乙醇，浸泡约12h，超声30min，共3次，滤过，收集合并滤液，减压浓缩，真空干燥。
超声波提取法：将三七粉碎成粗粉（20-40目），加入75%乙醇，浸泡约12h，超声30min，共3次，滤过，收集合并滤液，减压浓缩，真空干燥。
回流法与渗漉法的提取效果差不多,两种工艺均可行。但由于三七皂苷受热有被破坏的可能,同时在生产实际中以渗漉法较易操作,故三七的提取工艺以渗漉法为好。 色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应低于4000。
对照品溶液的制备：精密秤取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1多照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得。
供试品溶液得制备：取本品粉末（过四号筛）0.6g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，放置过夜。置80oC水浴上保持微沸2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失得重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10微升，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含人参皂苷Rg1（CH42H72O14）、人参皂苷Rb1（C54H92O23）及三七皂苷Rg1（C47H80O18）的总量不得少于5%。 光谱鉴别：
1.三七的紫外光谱：取样品粉末0.2g，加入甲醇5ml，冷浸2h，时时振摇，滤过，滤液用甲醇稀释至含药材约为20mg/ml的溶液，测定其紫外光谱。结果三七在268±1nm波长处有最大吸收，在262±1nm波长处有最小吸收。
2.三七不同炮制品的紫外光谱：取样品粉末2.5g，置索氏提取器中，加无水乙醇60ml提至醇无色，提取液定容至100ml，取1ml，置25ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，于UV-265型自动分光光度计上，在200～400nm波长范围内测定其紫外光谱。结果三七生品与炮制品紫外光谱无明显差异。

图2 三七不同炮制品的紫外光谱图 1.蒸制品 2.生品 3.油炸品
核磁共振光谱鉴别：
取样品粉末5～10g，加95%乙醇50～100ml，于水浴上加热回流1h，滤取乙醇液，加少量水使乙醇浓度达80%左右，用石油醚萃取3次(50，40，40ml)，乙醇层减压回收溶剂至乙醇全部蒸出，加水60ml及少许NaCl，用乙醚萃取3次(40，30，30ml)，合并乙醚萃取液。水层再用水饱和的正丁醇萃取2次，合并正丁醇萃取液。将乙醚萃取液用5%Na2CO3水溶液萃取3次(40，30，30ml)，再用水洗涤乙醚至中性，回收乙醚后得总提取物A。将正丁醇萃取液用正丁醇饱和的5%Na2CO3水溶液萃取3次(40，30，30ml)，正丁醇层用正丁醇饱和的水洗涤至中性，回收正丁醇至干后得总提取物B。取总提取物A和B少许，分别溶于CDCl3和DMSO-d6中，于JEOL-FX60Q型NMR波谱仪上测定其核磁共振氢谱(1HNMR)。1HNMR工作频率为59.75MHz，分别以CDCl3和DMSO-d6为内标，δTMS＝δCHCl3+7.26，δTMS＝δDMSO+2.50，测定温度常温，谱宽为1000Hz，平均累加次数为60～100次。结果三七总提取物B在δ0.81～5.09区间出现特征共振峰，总提取物A在δ4.88～6.25区间出现特征共振峰。

图3 三七的核磁共振氢谱图 1.总提取物A 2.总提取物B 急性毒性：三七乙醇提取物小鼠静脉注射的LD50为836±17mg/kg。生三七总皂苷小鼠静注的LD50为110.67±14.0mg/kg，熟三七总皂苷小鼠静注的LD50为105.33±58.6mg/kg。口服LD50>5000mg/kg，静注LD50为396mg/kg。三七急性毒性剂量范围，随着实验条件不同，差异较大。
长期毒性：三七粉1g/kg、三七皂苷0.4g/kg分别给兔灌胃，每日1次，7d为1疗程，每疗程间歇1d，连续4疗程，除三七粉组血糖有一定降低外，对红细胞、白细胞及分类、血红蛋白、凝血时间、血清胆固醇、血清总脂及β-脂蛋白均无明显影响。 散瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑损伤。3～9g。研末吞服，一次1～3g。
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