3,3′,5,5′-四甲基联苯胺

3,3′,5,5′-四甲基联苯胺是一种重要的色原试剂。呈白色结晶粉末，无嗅、无味，难溶于水，易溶于丙酮、乙醚、二甲亚砜、二甲基甲酰胺等有机溶剂。它是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，3,3′,5,5′-四甲基联苯胺（TMB）会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。辣根过氧化物酶催化TMB显蓝色后可以使用2M H2SO4终止反应。加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度。

3,3′,5,5′-四甲基联苯胺是一种脂溶性较强的基团，因此容易进入细胞与细胞器中的HRP反应，且由于这种高度的脂溶性，使其易形成多聚体，在HRP活性部位产生粗大的、深兰色沉淀物，这使得TMB成为组化实验中的一种很好的发色团。同时反应产物的沉淀，使得HRP的活性部位更加暴露，利于酶氧化反应进行。TMB的反应产物为深蓝色，利于光镜观察，且反应产物越聚越大，常超出单个细胞器的范围(而DAB则被限制在其内)，故TMB反应的检测阈较低。

TMB经HRP作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为450nm。一种灵敏的特异性试剂，用于检测血液、测定血红蛋白、测定过氧化物酶。