偏诺皂苷元的制备方法

背景及概述^[1]

具有17-羟基甾体螺环结构的偏诺皂苷元(Pennogenin)之糖苷化合物是药用植物——重楼属植物的活性成分之一。喷脑皂甙主要存在于延苓草科的重楼属植物中，该属植物全世界共有24种，中国有19种，主产西南部，其中比较常见的是七叶一支花(ParispolyphyllaSmith)。该属植物中许多种类的根状茎可供药用，具有止血、祛痰、抑菌、镇痛等功效，用于功能性子宫出血、毒蛇咬伤、跌打损伤、无名肿痛等症的治疗，因而成为多种中成药和新药的主要原料。由于每年的消耗量远远超出了重楼的年生长量，长期挖掘野生植物不仅加剧多种著名中药的植物资源匮缺，而且还不可避免地导致植被破坏，影响生态环境。此外，作为中药的植物资源品种杂多，如使用的植物有：ParispolyphyllaSmith(七叶一支花)、ParischinensisFranch.(金线重楼)、Parispolyphyllavar.PlatypetalaFranch.(阔叶蚤休)、Parispolyphyllavar.PubescensHand.-Mazz.(毛脉蚤休)、Parispolyphyllavar.StenophyllaFranch.(狭叶蚤休)、Parispolyphyllavar.Yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.(云南重楼)、ParisdelavayiFranch.(滇王孙)、ParisquadrifoliaL.(轮叶王孙)等等，良莠不齐，品质各异，也直接影响着中药产品的质量。为了提高国产名药的产量和质量，加速中药现代化进程，除研究此类植物的人工繁殖之外，化学合成具有17-羟基甾体螺环结构的偏诺皂苷元并进而合成其糖苷化合物同样十分必要和重要。17-羟基螺甾烷类化合物合成的关键在于17-羟基的引入，国内外在这一领域开展合成研究的不多。发明人在九十年代初就已经开始17-羟基螺甾烷类化合物的合成及其方法研究，并已取得了一些研究成果。

制备^[1-2]

方法1：从七叶一枝花提取偏诺皂甙的方法，步骤包括：

(1)粉碎干燥七叶一枝花(过20目筛)，并将七叶一枝花、乙醇水溶液按一定比例进行混合，加热到60-80℃下回流提取一定时间；

(2)过滤除渣后，滤液在50℃下减压浓缩获得干燥物；

(3)将干燥物用60-80%甲醇溶液进行溶解，上硅胶柱进行吸附分离，收集含有目的物的洗脱液，并将其减压浓缩干燥，其中硅胶层析柱的洗脱液为氯仿-甲醇溶液，并且在硅胶层析柱进行2次上柱洗脱；

(4)第(3)步所得干燥物加入35%-40%乙醇水溶液进行溶解，上大孔吸附树脂X-5进行吸附分离，收集含有目的物的洗脱液，并将该洗脱液减压浓缩至原有体积的1/8-1/4，其中洗脱液为甲醇或乙醇水溶液；

(5)向浓缩液中加入70%乙醇水溶液使之充分溶解40℃左右，再加入2-4倍体积的水；

(6)将含有偏诺皂甙的乙醇溶液放置在低温下过夜结晶，得到淡黄色晶体，抽滤，得到偏诺皂甙粗品，重结晶得到偏诺皂甙纯品。

方法2：8mg(0.018mmol)螺甾烷类化合物2g溶于0.9mL二氧六环，再加入0.1mL水和2mg对甲苯磺酸，升温回流，TLC跟踪反应至完全。冷至室温，加入饱和NaHCO3溶液5mL，用乙酸乙酯提取(10×3mL)，酯层用饱和NaHCO3和NH4Cl溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥后减压浓缩，所得粗品经快速柱层析分离，得粉末状喷脑皂甙元6mg(77.5％产率)。

1H-NMR(300MHz，CDCl3)：5.35(d，1H，J＝4.2Hz，H-6)，3.98(dd，‘t’like，1H，J＝7.6Hz，H-16)，3.51(dd，1H，J＝3.6，10.8Hz，H-26)，3.38(dd，‘t’like，1H，J＝10.8Hz，H-26)，2.04(q，1H，J＝7.2Hz，H-20)，1.03(s，3H，H-19)，0.91(d，3H，J＝7.5Hz，H-21)，0.80(d，3H，J＝6.6Hz，H-27)，0.82(s，3H，H-18).

13C-NMR(75MHz，CDCl3)：141.0(s，C-5)，121.5(d，C-6)，110.3(s，C-22)，91.2(d，C-16)，90.3(s，C-17)，71.9(d，C-3)，67.0(t，C-26)，53.1(d，C-14)，49.9(d，C-9)，44.8(d，C-20)，43.9(s，C-13)，42.5(t，C-4)，37.4(t，C-1)，36.8(s，C-10)，32.2(t，C-2)，31.8(d，C-8)，31.8(t，C-12)，31.4(t，C-7)，31.0(t，C-15)，30.3(t，C-23)，29.9(d，C-25)，28.3(t，C-24)，20.9(t，C-11)，19.6(q，C-19)，17.3(q，C-27)，17.2(q，C-18)，8.2(q，C-21).

主要参考资料

[1]重楼中薯菠皂普元和偏诺皂普元的HPLC-APCI/MS分析

[2]CN200510112242.0由17-羟基-甾体内酯合成喷脑皂甙元的方法