硫酸庆大霉素检测及脱色方法

背景及概述^[1][2]

硫酸庆大霉素(Gentamycinsulfate，GEN)属氨基糖苷类抗生素，具有水溶性好、抗菌谱广、细菌耐药性低、血浆蛋白结合率低、用药方便和价格便宜等优点，是临床上常用的抗感染药物。

检测^[1]

但这类抗生素对耳、肾有一定的毒性，临床使用时需严格控制剂量，因此对硫酸庆大霉素的定量测定具有非常重要的意义。这类抗生素的含量测定多采用微生物法，但这种方法繁琐、费时、费用高，不适于快速检测。此外的测定方法还有高效液相色谱法、荧光法和分光光度法等。由于分光光度法具有方法简便、分析精度高、重复性好、可测范围广、仪器价廉等优点，是药物分析中应用较多的一类方法。四羧基铝酞菁(AlC4Pc)是一种性能优异、对光和热有较好稳定性的物质，作为光度试剂可测定蛋白质，但目前应用四羧基铝酞菁为指示物，以褪色分光光度法测定硫酸庆大霉素的方法尚未见报道。

CN201010579903.1提供一种四羧基铝酞菁褪色分光光度法测定硫酸庆大霉素的方法。

具体步骤为：

于10mL比色管中依次加入0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5mL 8～11μg/mL的硫酸庆大霉素溶液，0.05～1.5mL pH6.6的克拉克-鲁布斯(Clark-Lub’s C-L)缓冲溶液，0.5～2.0mL 0.9～1.1×10^-4mol/L的四羧基铝酞菁溶液，以不加硫酸庆大霉素的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇匀。于紫外可见分光光度计上，用1cm比色皿，以二次蒸馏水为参比，在波长690nm处分别测定含硫酸庆大霉素溶液的吸光度值A690nm和试剂空白的吸光度值A0，计算吸光度差值ΔA690nm＝A0-A690nm值，其吸光度差值ΔA690nm与硫酸庆大霉素浓度C在0.1～2.5μg/mL范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔA690nm＝0.2896C+0.0052，相关系数0.9998，检出限0.087μg/mL；另取硫酸庆大霉素注射液1～2mL，稀释后同法测定吸光度值，计算出硫酸庆大霉素注射液中硫酸庆大霉素的含量。

本发明测定方法灵敏度高、选择性好、简便、快捷、仪器价廉。

应用^[2]

CN201410005888.8公开了一种载硫酸庆大霉素多孔羟基磷灰石/PLGA微球的制备方法，包括以下步骤：将PLGA球加入丙酮/乙醇溶液，再加入磷酸氢二铵溶液，倒入硝酸钙溶液，调节pH，陈化，洗涤，烘干，煅烧，研磨，得到多孔羟基磷灰石;将羟基磷灰石粉末置于含硫酸庆大霉素/PEG的水溶液中，冷冻干燥，得到载硫酸庆大霉素的多孔羟基磷灰石；将PLGA溶液和载硫酸庆大霉素的多孔羟基磷灰石混匀，倒入聚乙烯醇溶液中，搅拌，水洗，冷冻干燥即得载硫酸庆大霉素多孔羟基磷灰石/PLGA微球。本发明制备的载硫酸庆大霉素多孔羟基磷灰石/PLGA微球药物负载率高，突释小，生物相容性好，制备工艺简单，原料易得，成本低廉，易于实现产业化。

脱色方法^[3]

硫酸庆大霉素生产脱色方法，具体包括以下步骤：

①、将庆大霉素转盐液冷却至3℃～7℃，用孔径为16～30um滤器过滤，滤液效价为200000～300000u/ml，滤液在460nm处透光度为10%～20%之间；

②、将上述滤液从下往上压入活性炭纤维吸附塔使滤液缓慢浸透活性炭纤维，活性炭纤维与滤液比例为1kg：20～30L，加热至55℃～60℃保温30～60min；或者将上述滤液加热至55℃～60℃后从下往上压入活性炭纤维吸附塔使滤液缓慢浸透活性炭纤维，活性炭纤维与滤液比例为1kg：20～30L，55℃～60℃保温30～60min；将上述进入吸附塔的滤液用压缩空气压出得备用液A；

③、将纯化水从下往上压入吸附塔至浸满活性炭纤维，洗涤活性炭纤维中的硫酸庆大霉素，然后用压缩空气压出，如此洗涤3次，至洗涤液中硫酸庆大霉素效价在1000u/ml以下，得备用液B；

④、将备用液A与含硫酸庆大霉素效价较高的备用液B合并使效价在150000～170000u/ml之间，在460nm处透光度为92%以上，其余洗涤液留于下一批次洗涤套用；

⑤、将上述合并后的液体经喷雾干燥后得硫酸庆大霉素成品；

⑥、脱色后，首先将pH值2.5～3.0的65℃硫酸溶液从下至上压入吸附塔至浸满活性炭纤维，洗涤回收活性炭纤维中的硫酸庆大霉素，然后用压缩空气压出，如此洗涤3次，第3次洗涤液中硫酸庆大霉素效价在500u/ml以下，合并3次洗涤液，按常规硫酸庆大霉素生产工艺操作（用氢氧化钠溶液调pH后再进行阳离子树脂交换，再经稀盐酸、稀氨洗涤，浓氨洗脱，浓缩，转盐脱色，喷雾干燥等工艺步骤）得到成品硫酸庆大霉素，可回收相当于正常批次产量4%左右的硫酸庆大霉素；

⑦、对经过步骤⑥处理过后的活性炭纤维，用0.3Mpa蒸汽在吸附塔从上至下以10BV/h流速进行30min冲洗，然后用压缩空气把液体压出顶净；

⑧、对经过步骤⑦处理过后的活性炭纤维，再用15％氢氧化钠溶液从下至上压入吸附塔至浸满活性炭纤维，以2BV/h流速进行45min冲洗，然后用压缩空气把液体压出顶净；最后用纯化水冲洗至pH值6～8之间，吸附塔内的活性炭纤维可累计使用50次后废弃。

上述的庆大霉素转盐液冷却后采用陶瓷滤器或滤布过滤，孔径为16～30um；所采用的活性炭纤维为粘胶基活性炭纤维，其比表面积在1800～2200m2/g之间。

图1是本发明脱色装置的结构示意图。

主要参考资料

[1] [中国发明,中国发明授权] CN201010579903.1 一种测定硫酸庆大霉素的方法

[2] CN201410005888.8一种载硫酸庆大霉素多孔羟基磷灰石/PLGA微球的制备方法

[3] [中国发明,中国发明授权] CN201110133851.X 一种硫酸庆大霉素生产脱色方法