硫酸庆大霉素的制备

背景及概述^[1]

硫酸庆大霉素为氨基糖苷类抗生素，对各种革兰阴性细菌及革兰阳性细菌都有良好抗菌作用，对各种肠杆菌科细菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、沙门菌属、志贺菌属、肠杆菌属、沙雷菌属及铜绿假单胞菌等有良好抗菌作用，奈瑟菌属和流感嗜血杆菌对该品中度敏感。对布鲁菌属、鼠疫杆菌、不动杆菌属、胎儿弯曲菌也有一定作用。对葡萄球菌属(包括金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌)中甲氧西林敏感菌株的约80％有良好抗菌作用，但甲氧西林耐药株则对该品多数耐药。对链球菌属和肺炎链球菌的作用较差，肠球菌属则对该品大多耐药，硫酸庆大霉素与β内酰胺类合用时，多数可获得协同抗菌作用。

制备^[1]

硫酸庆大霉素的制备方法，包括以下步骤：

1)取庆大霉素沙土孢子置于孢子斜面培养基上进行孢子培养，培养温度为36℃，培养时间为10天，得到斜面培养后的庆大霉素孢子；

庆大霉素沙土孢子的制备方法为：

a、沙土孢子培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0％，氯化钠(NaCl)0.05％，硝酸钾(KNO₃)0.1％，碳酸钙(CaCO₃)0.1％，磷酸氢二钾(K₂HPO₄)0.02％，麸皮1.8％，硫酸镁(MgSO₄)0.02％，琼脂2.0％，余量为水(本实施例具体为可溶性淀粉1.0g，氯化钠(NaCl)0.05g，硝酸钾(KNO₃)0.1g，碳酸钙(CaCO₃)0.1g，磷酸氢二钾(K₂HPO₄)0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁(MgSO₄)0.02g，琼脂2.0g，水94.91g)；配制好的沙土孢子培养基在每个茄子瓶中分装50ml，经温热灭菌后，斜放，凝固，温热灭菌条件为0.1MPa，30分钟；

b、于超净工作台上，在火焰保护下，用无菌接种棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培养基内，先划中线，而后从下而上往两边划线，均匀铺开，塞好棉塞；

c、培养与保存：接种好的斜面包扎好后，37℃恒温室架上培养10天，培养好的孢子斜面，4℃冰箱储存待用；

孢子斜面培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0％，氯化钠0.05％，硝酸钾0.1％，碳酸钙0.1％，磷酸氢二钾0.02％，麸皮1.8％，硫酸镁0.02％，琼脂2.0％，余量为水(本方法具体为可溶性淀粉1.0g，氯化钠0.05g，硝酸钾0.1g，碳酸钙0.1g，磷酸氢二钾0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁0.02g，琼脂2.0g，水94.91g)；

2)将步骤1)中得到的斜面培养后的庆大霉素孢子进行摇瓶培养，摇瓶培养的孢子接入量为：孢子斜面挖取0.25cm2接入一个摇瓶，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素摇瓶菌丝；

摇瓶培养基的配方按重量百分比计为：可溶性淀粉1.0％，氯化钠0.05％，硝酸钾0.1％，碳酸钙0.1％，磷酸氢二钾0.02％，麸皮1.8％，硫酸镁0.02％，琼脂2.0％，余量为水(本方法具体为可溶性淀粉1.0g，氯化钠0.05g，硝酸钾0.1g，碳酸钙0.1g，磷酸氢二钾0.02g，麸皮1.8g，硫酸镁0.02g，琼脂2.0g，水94.91g)；

3)将步骤2)得到的庆大霉素摇瓶菌丝置于种子培养基上进行种子培养，种子培养的接入量为：庆大霉素摇瓶菌丝按种子培养基体积的千分之二接入摇瓶种子，培养温度为36℃，培养时间为48小时，得到庆大霉素种子培养物；

种子培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黄豆饼粉1.0％，硝酸钾0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化钴(CoCl₂)0.0005％，余量为水(本方法具体为淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黄豆饼粉1.0g，硝酸钾0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化钴(CoCl₂)0.0005g，水为95.7495g)；

4)将步骤3)得到的庆大霉素种子培养物置于繁殖罐中进行扩大培养，庆大霉素种子培养物接入量为扩大培养基体积的20％，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到庆大霉素繁殖培养物；

扩大培养基的配方按重量百分比计为：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黄豆饼粉1％，硝酸钾0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化钴(CoCl₂)0.0005％，余量为水(本方法具体为淀粉1.5g，玉米粉1.5g，黄豆饼粉1.0g，硝酸钾0.05g，蛋白胨0.2g，二氯化钴(CoCl₂)0.0005g，水为95.7495g)；

5)将步骤4)得到的庆大霉素繁殖培养物置于发酵培养基上进行发酵，庆大霉素繁殖培养物的接入量为发酵培养基体积的20％，发酵温度为34℃，发酵时间为120小时，得到庆大霉素发酵产物；

发酵培养基的配方按重量百分比计为：淀粉4.5％，黄豆饼粉3.5％，玉米粉1.0％，碳酸钙0.7％，蛋白胨0.3％，二氯化钴(CoCl₂)0.0015％，硝酸钾0.01％，硫酸铵0.1％，泡敌0.01％，余量为水(本方法具体为淀粉4.5g，黄豆饼粉3.5g，玉米粉1.0g，碳酸钙0.7g，蛋白胨0.3g，二氯化钴(CoCl₂)0.0015g，硝酸钾0.01g，硫酸铵0.1g，泡敌0.01g，水为89.8785g)；

6)将步骤5)得到的庆大霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为2‑3，得到庆大霉素酸化液；酸化处理是以浓度30％的盐酸进行处理，调pH2～3；

7)将步骤6)得到的庆大霉素酸化液进行中和处理，处理后得到pH值为6.8的庆大霉素溶液；中和处理是以浓度40％的氢氧化钠进行处理，调pH6.8；

8)将步骤7)得到的庆大霉素溶液以732树脂进行吸附处理，得到吸附后庆大霉素溶液；吸附处理所用的732树脂为001×7强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂；

9)将步骤8)得到的吸附后庆大霉素溶液上柱去除Ca²⁺、Mg²⁺、Cl^‑1，得到去除离子的庆大霉素溶液；去除Ca²⁺、Mg²⁺、Cl^‑1的柱子为Φ1m高2m柱；

10)将步骤9)得到的去除离子的庆大霉素溶液通过饱和树脂后以质量百分含量为4.5％的氨水进行解析，得到庆大霉素解析液；所述饱和树脂是指每毫升树脂吸附了8万单位庆大霉素得到的树脂；

11)将步骤10)得到的庆大霉素解析液以711树脂进行脱色，得到庆大霉素脱色液；脱色处理所用的711树脂为强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂；

12)将步骤11)得到的庆大霉素脱色液以薄膜进行浓缩，得到庆大霉素浓缩液；浓缩量为500L/h，浓缩至原来的1/7；

13)将步骤12)得到的庆大霉素浓缩液加入硫酸后制得硫酸庆大霉素；硫酸的浓度为98％，调至pH5.3；

14)将步骤13)得到硫酸庆大霉素通过喷雾干燥制得硫酸庆大霉素成品，喷雾干燥的条件为进风温度130℃，出风温度85℃，喷速100L/h。

参考文献

[1][中国发明,中国发明授权]CN201310099477.5硫酸庆大霉素的制备方法