SNDX-5613的体外活性研究

Menin小分子抑制剂的研发已成为近年来的热门领域，近期，由Syndax Pharmaceuticals公司研发的Menin抑制剂revumenib（又名SNDX-5613）在临床试验中取得积极结果，其针对携带MLL1或NPM1突变的复发性或难治性急性白血病患者。美国食品药品监督管理局（FDA）已将revumenib授予突破性疗法认定。在Ⅰ/Ⅱ期临床试验中，针对MLL1或NPM1突变的急性白血病患者的总体反应率达到了53%，其中30%的患者实现了完全或部分的血液学缓解与恢复。然而，在Ⅰ期临床试验中观察到，虽然患者最初对Menin抑制剂有反应，但随后可能会出现耐药性。研究发现，约38.7%的患者携带至少1个MEN1基因点突变。由此可见，针对revumenib产生耐药的Menin突变开发第2代抗耐药Menin抑制剂极为迫切。

体外活性评价

首先对阳性参照药物（SNDX-5613）进行了稀释，以制备一系列浓度梯度的溶液，其中稀释液作为起始点，按照3倍稀释度进行连续稀释，共设置10个稀释点及一个未添加药物的对照点。随后，将50/100nL的化合物分别转移至384孔板中，每个孔设置两个重复样本。转移完毕后，对384孔板进行1000r/min的离心处理。接下来，分别向每个孔中加入Menin-WT、Menin-M327I和Menin-T349M蛋白5 μL，并在25℃下孵育10min。之后向每个孔中加入FITC-MLL4-43荧光标记底物5μL，再次进行1000r/min的离心，并在25℃下继续孵育60min。最终，利用BMG荧光酶标仪读取荧光信号强度。数据分析部分，采用非线性回归模型来拟合化合物的IC₅₀。

本研究评估了这5个候选化合物子（RG-06、RG-07、RG-10、D5-18-9、D5-18-11）对Menin蛋白野生型（Menin-WT）及其两种突变型（Menin-M327I和Menin-T349M）的抑制活性，并将这些结果与参考分子SNDX-5613进行比较。IC₅₀被用来量化表征化合物的活性，单位为纳摩尔（nmol/L），其中较低的IC₅₀表示更强的抑制效果，实验结果如表所示。对于Menin-WT，相较于阳性参考分子SNDX-5613的IC₅₀（11.86nmol/L），化合物RG-06和RG-10的IC₅₀可分别达到32.91和9.681nmol/L，表明它们对野生型具有和SNDX-5613相同数量级的抑制活性。特别是RG-10，其活性甚至优于参考分子。对于Menin-M327I突变体而言，参考分子SNDX-5613的IC₅₀增加至1421nmol/L，表明对该突变体的抑制活性显著下降。相比之下，RG-06和RG-10的IC₅₀分别为513.8和233.2nmol/L，虽然抑制活性有所降低，但仍具有一定的抑制效果。而化合物D5-18-11和D5-18-9的IC₅₀较高，表明这两个化合物对M327I突变体的抑制活性较弱。对于Menin-T349M突变体而言，参考分子SNDX-5613的IC₅₀为280.2nmol/L，相比野生型活性也有所降低，但幅度没有M327I大。值得注意的是，RG-06和RG-10在这一突变型中仍表现出显著的抑制活性，IC₅₀分别为53.8和40.09nmol/L，显著低于SNDX-5613，表明这两个化合物对Menin-T349M突变体具有明显的优势[1]。

参考文献

[1]曾浩,吴国振,邹武新,等. 基于人工智能驱动分子工厂技术的Menin抑制剂优化[J]. 中国药科大学学报,2024,55(3):326-334. DOI:10.11665/j.issn.1000-5048.2024040904.